ELISA試劑盒選擇的幾條準(zhǔn)則
一、依據(jù)試驗物種及待檢樣品性質(zhì)來挑選ELISA
假如試驗君的試驗樣品為人、小鼠或大鼠樣品,那么要挑選一個適宜的試劑盒相對容易,但假如您的試驗樣品來歷于其他物種如雞、牛、猴等,則市面上能供給的試劑盒品種卻很少。且不行輕信能供給近萬種試劑盒,覆蓋多物種的供貨商。但假如又非要檢測這些物種的目標(biāo)時,要對待檢物(如有種屬差異性)進行同源性剖析以及試劑盒的種屬穿插反響數(shù)據(jù)。關(guān)于樣品類型而言,一般的商業(yè)化試劑盒都經(jīng)過血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗證。在挑選試劑盒時,要具體閱覽說明書,比方血漿樣本抗凝劑的運用是否與試劑盒兼容。別的,在某些情形下樣品中會存在攪擾要素比方溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體(HAMA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因而需依據(jù)樣品來挑選試劑盒,必要時還要依據(jù)樣正本恰當(dāng)優(yōu)化?;蛟跇悠匪鸭?,先閱覽一些牢靠供貨商試劑盒的說明書或直接咨詢。假如您的樣品為安排或細(xì)胞裂解物,則需求更慎重的挑選試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經(jīng)過多種來歷安排樣本的驗證。這需求試驗君能了解不是所有試劑盒所用的抗體對,都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的意圖蛋白,還要考慮安排樣品的基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect)等。但假如試驗君要了解安排樣品的制備問題,我們另起一文來總結(jié)。
二、詳盡比較試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)
ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包含板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及穿插反響性、回收率等。假如試驗君常常開展ELISA試驗,主張運用同一廠家的試劑盒,這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然條件是試驗條件的一致性)。關(guān)于科研用的定量ELISA試劑盒,不同的生產(chǎn)廠家運用的抗體對、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研制實力不盡相同,天然不同廠家試劑盒測出的數(shù)據(jù)會有差異。
三、依據(jù)樣品中檢測物水平來挑選試劑盒
假如試驗君關(guān)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參閱的數(shù)據(jù),挑選寬動力學(xué)檢測規(guī)模的試劑盒。假如樣品中待檢物的含量很低,主張?zhí)暨x高靈敏度的試劑盒。為了下降基質(zhì)效應(yīng),有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。假如樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過試劑盒的檢測規(guī)模(標(biāo)曲規(guī)模), 也需做恰當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在計算結(jié)果時,需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
四、供貨商資質(zhì)評價
縱觀國內(nèi)外ELISA試劑盒供貨商,“柏君”估計至少100余家。有些供貨商可供給數(shù)百種常用目標(biāo)ELISA,然而有些供貨商則聲稱可供給數(shù)千種乃至上萬種目標(biāo)的試劑盒,但質(zhì)量參差不齊,更有濫竽充數(shù)禍患科研之輩。那假如挑選供貨商呢?
1、從同行或試驗室同僚了解供貨商的口碑,售前售后的處理狀況。
2、查詢供貨商的網(wǎng)站具體了解相關(guān)目標(biāo),可查詢這些目標(biāo)是否現(xiàn)已開宣布特異性抗體?假如查遍全球連抗體都還不行獲取,又怎么開宣布ELISA試劑盒呢? 第3、文獻引證是王道,尤其是SCI期刊文章對供貨商產(chǎn)品的引證。
4、了解供貨商的研制前史和品牌史,許多供貨商一再替換公司名或替換公司注冊地,其間名堂試驗君應(yīng)該能悟出。不要迷信國外“品牌”,國外“品牌”不代表是世界知名品牌。許多打著國外旗幟的公司,其實就是空殼的皮包公司,從全球OEM殘次產(chǎn)品。國外供貨商也有售后不給力的時分。
五、依據(jù)樣本可獲得性來挑選試劑盒
一般而言,商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供貨商的試劑盒對樣品的用量要求可少至10ul。假如您的樣品很寶貴或較難獲取,則需求仔細(xì)考慮試劑盒對樣品用量的要求。假如樣品量少,且要做多因子檢測時更需慎重。
六、經(jīng)費預(yù)算
說了半天,仍是要看課題經(jīng)費的預(yù)算。沒經(jīng)費咋搞科研呢?世界公認(rèn)的知名品牌一般質(zhì)量牢靠,文獻引證多。但世界品牌由于進口和世界運送等本錢較高,因而售價也較高。其實上等國產(chǎn)品牌也是不錯的挑選, 因省去不少物流和報關(guān)費用,與國外進口試劑盒比較價格上有比較大的優(yōu)惠,并且能供給比較靈敏的包裝標(biāo)準(zhǔn), 如48tests小包裝,十分合適我國國情。國內(nèi)ELISA品牌靠譜的仍是有4到5家,這兒就不做硬廣告了,試驗君能夠上丁香通、小木蟲等行業(yè)資訊途徑或論壇等了解。當(dāng)然您能夠隨時聯(lián)絡(luò)“柏君”為您排憂解難。
七、認(rèn)清訂貨途徑
不論是世界仍是國內(nèi)品牌,都需求在訂貨前先與生產(chǎn)廠商具體溝通產(chǎn)品細(xì)節(jié)(比方酶標(biāo)板是否可拆卸),了解售前售后技術(shù)服務(wù)才能等。然后咨詢其官方訂貨途徑,比方直接向廠家訂貨或經(jīng)過我國區(qū)或省級授權(quán)代理商經(jīng)銷商訂貨。謹(jǐn)防假冒產(chǎn)品,花了錢是小事,試驗數(shù)據(jù)的牢靠性、真實性是大事呀,耽誤了時間延遲了結(jié)業(yè)更是不無處抱怨! 空留悲傷淚。挑選正規(guī)途徑,挑選上等質(zhì)量!