――達(dá)科為ELISA超敏試劑盒
       酪胺信號(hào)放大技術(shù)（tyramide signal amplification,TSA）是上世紀(jì)90年代在傳統(tǒng)酶促放大理論基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)一種新的信號(hào)放大技術(shù)。其基本原理如下：在過(guò)氧化氫存在時(shí)，一些酶如辣根過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酶等可以催化一種酪胺的底物為一種非常活躍的短壽命中間體；在短時(shí)間內(nèi)，中間體可以共價(jià)結(jié)合到周圍蛋白的富電子表面形成酪胺化復(fù)合物，大量富集成以酶為中心的類似“島”或者“樹(shù)”狀的聚集團(tuán)（如圖）；可以在酪胺上標(biāo)記熒光或者其它標(biāo)記物如生物素用于檢測(cè)。

      酪胺信號(hào)放大技術(shù)不是檢測(cè)技術(shù)，只是放大系統(tǒng)，它可以提高ELISA、IHC和ISH等的靈敏度10-100倍。另外，TSA作為擴(kuò)大信號(hào)其理論本身不會(huì)增加非特異性信號(hào)，而不是像原位PCR那樣擴(kuò)增檢測(cè)目標(biāo)，所以不會(huì)造成檢測(cè)偏差和假陽(yáng)性。
      但是，若靶標(biāo)本底生物素水平較高或者抗體交叉反應(yīng)比較高，同樣實(shí)驗(yàn)背景會(huì)成倍地放大。TSA導(dǎo)致新問(wèn)題需要采用產(chǎn)生更低背景的實(shí)驗(yàn)材料或方法，來(lái)降低檢測(cè)技術(shù)的非特異性背景，為T(mén)SA放大系統(tǒng)提供足夠的空間。如在分子雜交中使用DNP標(biāo)記的TSA Plus，由于DNP是生物體內(nèi)罕見(jiàn)的分子，檢測(cè)背景很低，性噪比就高。
      TSA應(yīng)用范圍廣泛，ELISA, **組化（IHC），原位雜交（ISH），芯片檢測(cè)和其它任何使用HRP或AP的檢測(cè)方法中都可以應(yīng)用，它的放大效應(yīng)可以使ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)樣品濃度從皮克級(jí)（10－12）別提高到飛克級(jí)別（10－15）。
      TSA應(yīng)用在傳統(tǒng)ELISA上開(kāi)發(fā)出超敏ELISA，這使檢測(cè)人體內(nèi)飛克級(jí)別的細(xì)胞因子成為可能，有利地促進(jìn)科學(xué)深入研究人體內(nèi)微量蛋白的作用。超敏ELISA還可以間接節(jié)省客戶研究所用的寶貴樣品，客戶在有限的樣本中檢測(cè)更多蛋白指標(biāo)。
     基于TSA技術(shù)開(kāi)發(fā)的ELISA超敏試劑盒，其TSA放大步驟如下:
     1.在傳統(tǒng)ELISA基礎(chǔ)上，HRP結(jié)合到微孔板后，再加入放大物質(zhì)A（ biotinyl-tyramide ,B-T）到孔內(nèi)，孵育20分鐘。
     2.洗滌4次。
     3.加入streptavidin-HRP(SA-HRP)，結(jié)合 B-T。孵育20min。
     4.洗滌4次。
     5.加入TMB顯色10-15分鐘，中止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。
     以人IL-6 ELISA產(chǎn)品為例，超敏試劑盒與普通試劑盒實(shí)驗(yàn)對(duì)比圖表如下：

 放大倍數(shù)50       酶： HRP         顯色底物：TMB          檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm

檢測(cè)范圍:4 - 0.125 pg/ml
靈敏度:0.04pg/ml

 人IL-6 ELISA超敏試劑盒同類產(chǎn)品比較如下：

      人IL-6 ELISA超敏試劑盒性能對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，DKW公司與另外四家公司超敏試劑盒在規(guī)格、檢測(cè)范圍、靈敏度和變異系數(shù)方面沒(méi)有顯著差別；在實(shí)驗(yàn)操作的孵育時(shí)間上，DKW公司超敏試劑盒的孵育時(shí)間只有120分鐘，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其它四家公司的孵育時(shí)間。