DNA合成儀的操作步驟

        以亞磷酰胺寡核苷酸的合成為例，介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成試劑包括：5/-DMT保護堿基，A、G、C、T的亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，醋 酸 酐，N-甲基咪唑封閉劑，三***（TCA）脫保護液，12氧化混合物、乙腈清洗溶劑、除氨溶液。使用步驟如下：
         1）仔細檢查合成儀上所有試劑瓶的試劑量，必要時更換試劑瓶，特別注意乙腈的量，因為溶劑量比較大。
         2) 將標記好的干凈收集瓶放在合成器上。
         3) 將要合成的DNA序列輸入合成儀。
         4) 檢查選擇的合成步驟是否正確。
         5) 選擇結束方式：TritylOffAuto 為儀器的原始狀態(tài)。如果您打算將純化的寡核苷酸與 5-DMT 基團連接，請將其更改為 TritylOnAuto 的結束狀態(tài)。
         6）選擇結束方式，一般是系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
         7) 在每個列監(jiān)視器的用戶名下，輸入要保存的名稱。
         8) 用代碼代替相應的 DNA 序列標記每個收集瓶。
         9) 打印出每列設置的詳細信息。
         10) 檢查打印信息是否正確。
         11) 運行StartColumn 步驟，檢查每一列的位置，確保合成器上的合成列處于正確位置。
         12）檢查與合成器相連的溶劑殘留物（廢液瓶）是否已滿。
         13）如果使用部分收集器收集DMT各脫保護步驟的流出物，確保試管足夠干凈，打開部分收集器，確保DMT廢液管線通向部分收集器。
         14) 啟動循環(huán)，運行啟動程序，清洗試劑管路，取出原試劑。
        注：TritylOnAuto 表示合成寡核苷酸的5端有一個DMT，從固體載體上切下，保存在收集瓶中； TritylOffAuto 表示合成寡核苷酸 5. 末端核苷酸無保護基團，從固體載體上切下，保存在收集瓶中； TritylOnManual是指合成寡核苷酸的5末端核苷酸有DMT，寡核苷酸沒有從固體載體上切下來，但保存在合成柱中； TritylOffManual是指在合成寡核苷酸的5中，末端核苷酸沒有保護基團，寡核苷酸沒有從固相支持物上切斷，而是留在合成柱中