分光光度法測(cè)定葉綠素含量

        一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
        1. 了解葉綠素在植物組織中的分布和性質(zhì)。
         2、掌握測(cè)定葉綠素含量的原理和方法。
         2、實(shí)驗(yàn)原理
        葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，與植物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡時(shí)，會(huì)釋放葉綠素。游離葉綠素極不穩(wěn)定，對(duì)光熱敏感；在酸性條件下，葉綠素生成綠褐色脫鎂葉綠素，可在稀堿液中水解成亮綠色的葉綠素酸鹽以及植醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有葉綠素a和葉綠素b兩種，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
        測(cè)定葉綠素含量的方法很多，其中主要有：
         1、原子吸收光譜法：通過(guò)測(cè)定鎂的含量，間接計(jì)算葉綠素的含量。
         2、分光光度法：用分光光度計(jì)測(cè)定葉綠素提取物在*大吸收波長(zhǎng)處的吸光度，然后用朗伯-比爾定律計(jì)算提取物中各色素的含量。
        葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有*大吸收，兩條吸收曲線在652nm處相交。因此，測(cè)定提取物在645nm、663nm、652nm波長(zhǎng)處的吸光度值，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。
        三。儀器、原料和試劑
        儀器：分光光度計(jì)、電子上裝天平（靈敏度0.01g）、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦拭紙、滴管。
        材料：新鮮（或干燥）植物葉子
        試劑：1.96%乙醇（或80%丙酮）； 2.石英砂； 3、碳酸鈣粉
        四。操作步驟
        取新鮮的植物葉子（或其他綠色組織）或干燥的材料，擦去組織表面的污垢，去除中脈并切成碎片。稱取2 g新切樣品，置于研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3 mL 95%乙醇研磨成均質(zhì)漿液，加入10 mL乙醇，繼續(xù)研磨直到組織變白。靜置 3 到 5 分鐘。
        取濾紙1張置于漏斗中，用乙醇潤(rùn)濕，沿玻璃棒將提取液倒入漏斗中，濾液流入100mL棕色容量瓶；用少量乙醇沖洗研缽、研杵和殘留物數(shù)次，*后一起將殘留物一起倒入漏斗中。
        用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙中沒(méi)有綠色和殘留物。*后使用將乙醇稀釋至 100mL 并充分搖勻。
        取葉綠體色素提取物在665nm、645nm和652nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以95%乙醇為空白對(duì)照。
        五。計(jì)算
        根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算植物材料中葉綠素a、b和總?cè)~綠素的含量