新聞詳情
PCR整個基本反應步驟
日期:2024-12-28 02:48
瀏覽次數(shù):16
摘要:
PCR的原理:PCR的基本過程類似于DNA的天然復制,特異性依賴于與靶序列兩端互補的Oligo引物。整個過程由變性-退火-延伸3個基本反應步驟構(gòu)成:
1,模板DNA變性:模板或經(jīng)PCR擴增形成的DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,雙鏈之間氫鍵斷裂,雙股螺旋解鏈,變成兩條單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下一輪反應做準備。
2,模板DNA與引物的退火(復性):DNA加熱變性成單鏈后,當溫度降至一定程度(55℃左右)時,引物即與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合。
3,引物的...
PCR的原理:PCR的基本過程類似于DNA的天然復制,特異性依賴于與靶序列兩端互補的Oligo引物。整個過程由變性-退火-延伸3個基本反應步驟構(gòu)成:
1,模板DNA變性:模板或經(jīng)PCR擴增形成的DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,雙鏈之間氫鍵斷裂,雙股螺旋解鏈,變成兩條單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下一輪反應做準備。
2,模板DNA與引物的退火(復性):DNA加熱變性成單鏈后,當溫度降至一定程度(55℃左右)時,引物即與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合。
3,引物的延伸(72℃):在Taq DNA聚合酶的作用下,DNA模板上的引物以dNTP為原料,按A-T、C-G堿基配對與半保留復制原則,合成一條新的與模板DNA鏈互補的鏈。
重復上述 變性-退火-延伸 的循環(huán)過程,每一循環(huán)獲得的“半保留復制鏈”都可成為下次循環(huán)的模板。通常每完成一個循環(huán)需時為2~4min,2~3h就能將靶核酸擴增放大上億倍(30個循環(huán)時,靶產(chǎn)物數(shù)量約為10億)。(注:PCR的第1和第2個循環(huán),并沒有短的目的片段,只是在第3個循環(huán)后才有,并且有部分雙鏈的長片段將始終伴隨整個擴增過程)