產(chǎn)品名稱	4T1+luc細(xì)胞
規(guī)格	詳見說明書
貨號(hào)	BH-8010746

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。

②生物膜與細(xì)胞器的研究。

③細(xì)胞骨架體系的研究。

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。

⑧細(xì)胞工程。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、熒光鑒定：

    1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。 

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

AIM2 英文名稱： 干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體  0.1ml

Aquaporine 2 英文名稱： 水通道蛋白-2抗體  0.1ml

ABI2 英文名稱： 腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體  0.1ml

ARL11 英文名稱： ADP核糖基化因子樣11抗體  0.2ml

ARMCX3 英文名稱： ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體  0.2ml

ARMCX1 英文名稱： ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體  0.2ml

ARMCX2 英文名稱： ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體  0.2ml

Apg10 英文名稱： 自噬相關(guān)蛋白10抗體  0.2ml

ACBD6 英文名稱： ?；o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體  0.2ml

Aminoacylase 1 英文名稱： 氨基?；?抗體  0.2ml

Adipose Triglyceride Lipase 英文名稱： 脂肪甘油三酯脂酶抗體  0.1ml

phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱： 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體  0.1ml

Amphiregulin 英文名稱： 雙調(diào)蛋白（結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長(zhǎng)因子）抗體  0.1ml

phospho-AQP2(Ser264) 英文名稱： 磷酸化水通道蛋白2抗體  0.1ml

AXL 英文名稱： 粘附相關(guān)激酶抗體  0.1ml

phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 英文名稱： 磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體  0.1ml

phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶B抗體  0.1ml

D-天冬氨酸

英文名稱：D-Aspartic acid；(R)-Aminosuccinic acid；(R)-2-Aminosuccinic acid；D-Asparaginic Acid；H-D-Asp-OH

其他名稱：D-天門冬氨酸；D-天冬酸；D(-)氨基丁二酸；D(-)氨基琥珀酸；二胺基丁二酸

CAS號(hào)：1783-96-6

C4H7NO4=133.10

級(jí)別：BR

含量：≥99.0%

比旋光度：-24～-26o

PH：2.5～3.5

氯化物：≤0.02%

銨鹽：≤0.02%

鐵鹽：≤10ppm

砷鹽：≤1ppm

重金屬：≤10ppm

干燥失重：≤0.1%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結(jié)晶粉末。溶于熱水和稀鹽酸，微溶于冷水，不溶于乙醇和乙迷。相對(duì)密度(d1313)1.6613

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途

保存：RT

DL-天冬氨酸

英文名稱：DL-Aspartic acid；(±)-2-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid

其他名稱：DL-天門冬氨酸；DL-天門酸；DL-氨基琥珀酸；DL-2-氨基丁二酸；DL-天冬酸；DL-氨基丁二酸

CAS號(hào)：617-45-8

C4H7NO4=133.10

級(jí)別：BR

含量：≥99.0%

鑒別：合格

PH：2.7～3.3

干燥失重：≤0.20%

硫璜灰：≤0.10%

銨鹽：≤100ppm

氯化物：≤100ppm

硫酸鹽：≤200ppm

重金屬：≤10ppm

砷鹽：≤1ppm

鐵鹽：≤3ppm

天冬酰胺酸：≤0.10%

4T1+luc細(xì)胞氮含量：10.4～10.6%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結(jié)晶粉末。微溶于水，不溶于乙醇及乙迷。相對(duì)密度(d12.512.5) 1.6632。熔點(diǎn)338～339℃(278～280℃)

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。微生物培養(yǎng)基

保存：RT

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。