本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（IICCTTPP）定量檢測(cè)試劑盒（EELLIISSAA）

                                 使用說明書

【試劑盒名稱】

 人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（ICTP）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（ICTP）的含量。

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)**吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)

先包被人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（ICTP）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，

洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依

次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸

的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（ICTP）濃度呈正相關(guān)，

450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終

肽（ICTP）含量。

【試劑盒組成】

   1  酶標(biāo)包被板              12孔×8條         7    顯色劑A液        6mL

   2  標(biāo)準(zhǔn)品                   0.3mL×6管         8    顯色劑B液        6mL

   3  20倍濃縮洗滌液       25mL               9    終止液              6mL

   4  樣本稀釋液              6mL                10  說明書                1份

   5  特殊稀釋液              6mL                11  封板膜                2張

   6  酶標(biāo)試劑                 6mL                12  密封袋                 1個(gè)

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號(hào)→6號(hào)）濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0.25μg/L

【需要而未提供的試劑和器材】

  1、37℃恒溫箱

  2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

  3、精密移液器及一次性吸頭

  4、蒸餾水

  5、一次性試管

  6、吸水紙

【操作步驟】

 1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

 2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

 3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、

待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先

加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙

上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。

7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s

（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。

10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣

本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。*終濃

度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN），因?yàn)榀B氮鈉（NaN）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即

試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.25-8μg/L，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確

定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（0.25-8μg/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為

樣本*終濃度。

6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、

樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

【操作程序總結(jié)】

1）準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

2）加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘

3）洗板4次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

4）洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

5）加入終止液

6）15分鐘之內(nèi)讀OD值

7）計(jì)算

【規(guī)格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】