1、為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代?
體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長。當細胞鋪滿培養(yǎng)器皿的表面時，正常的細胞停止生長，但是轉化(即發(fā)生遺傳物質突變)的對接觸抑制不敏感的細胞會繼續(xù)生長。如果不及時傳代，這些轉化的細胞就會逐步取代正常的細胞。
2、為什么大多數細胞培養(yǎng)需要用二氧化碳培養(yǎng)箱?
一般細胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)(它是人體血液中*重要的pH緩沖系統(tǒng))，大多數培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。
對大多數以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言，以為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。
是不是采用其他pH緩沖系統(tǒng)就不需要二氧化碳培養(yǎng)箱了呢?人們發(fā)現由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的HCO3-會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養(yǎng)，還是需要二氧化碳培養(yǎng)箱。
細胞培養(yǎng)液中常附加其他的pH緩沖系統(tǒng)，比如HEPES緩沖系統(tǒng)，來增加pH緩沖能力。HEPES在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養(yǎng)器皿被拿到二氧化碳培養(yǎng)箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖系統(tǒng)就會失去效果，這時候HEPES緩沖系統(tǒng)就能繼續(xù)保持pH的穩(wěn)定。
3、怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養(yǎng)條件?
ATCC(American Type Culture Collection) 收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cellsand hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。
數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關文獻等資料。
4、二氧化碳培養(yǎng)箱的挑選和使用
由于動物細胞培養(yǎng)液一般使用碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)，要求培養(yǎng)環(huán)境中維持一定濃度的CO2，所以動物細胞的培養(yǎng)一般需要CO2培養(yǎng)箱。
CO2培養(yǎng)箱采用兩種不同的CO2維持系統(tǒng)。一種方式是通過使用空氣泵，將CO2和空氣按一定比例混合后吹入培養(yǎng)箱。另一種方式是通過一個自動的CO2檢測控制系統(tǒng)，在檢測到CO2濃度低于要求濃度時打開CO2氣閥充入CO2。由于前一種方法耗費CO2而且不容易**控制CO2濃度，先進的CO2培養(yǎng)箱都采用自動監(jiān)控系統(tǒng)來維持CO2的濃度。
配有自動CO2檢測控制系統(tǒng)的培養(yǎng)箱需要根據生產廠家的說明，定期做CO2濃度的測試和矯正。
CO2培養(yǎng)箱的隔熱采用水套式和氣套式兩種類型。水套式需要用戶在安裝培養(yǎng)箱時培養(yǎng)箱壁的空間內灌入大量蒸餾水。由于水的比熱容很高，水套式的優(yōu)點是有助于均勻散熱和避免形成冷區(qū)，以及在斷電后能夠比較好的減緩培養(yǎng)箱內溫度的降低。它的缺點是由于灌入大量的水，培養(yǎng)箱變得非常沉重，不易搬動。有效的隔熱系統(tǒng)和先進的表面散熱元件的使用使氣套式培養(yǎng)箱兼?zhèn)淞溯p便性和水套式培養(yǎng)箱的優(yōu)點，所以新型的CO2培養(yǎng)箱大多采用氣套式。
目前大多數實驗室都使用進口的細胞培養(yǎng)箱。雖然進口的產品質量上比較有保障，但價格很貴，而且售后服務不是很方便。國內的細胞培養(yǎng)箱的質量也有了很大的提高，
CO2培養(yǎng)箱一般配一個水盤，用以維持很高的濕度。水盤內的水要定期添加，水盤也要定期清洗以避免微生物的生長。
為了減少微生物的污染，有一些CO2培養(yǎng)箱提供**功能。有的可以加熱到比較高的溫度來**，有的則通過讓空氣循環(huán)通過一個紫外線腔體的辦法來**，這樣就**時就不需要中斷細胞的培養(yǎng)。
5、超凈臺的挑選和使用
為了避免污染，一般的細胞培養(yǎng)需要在超凈臺上進行。用于細胞培養(yǎng)的超凈臺的潔凈度一般為100級，即每立方英尺中大于0.5um的顆粒數量少于100顆，與計算機硬盤的生產環(huán)境要求相當。
在超凈臺內，過濾后的空氣垂直由上到下，或水平由內到外穩(wěn)定的流動，從而維持一個潔凈的操作環(huán)境。根據氣流的方向，超凈臺可分為垂直式層流和水平式層流兩種類型。
在水平式層流型超凈臺內，過濾后的空氣由內到外流動，在操作過程中比垂直式層流型更容易維持一個潔凈的環(huán)境，減少污染的機會。但是由于氣流吹向實驗操作者，增加了實驗操作者感染病原體的機會，所以大部分實驗室都采用垂直式層流型的超凈臺。
在普通的垂直式層流型的超凈臺內，過濾后的空氣自上往下流動，通過操作面板前后兩排開孔直接排出。這樣的超凈臺比較便宜，但是不適合病原體相關的實驗操作。相關病原體的操作必須要在生物**柜內進行。在生物**柜內，自上而下的過濾后的空氣經過超凈臺，然后再次過濾后，才被排到外面，從而大大減少了病原體擴散的機會。當然生物**柜比較貴，但考慮到培養(yǎng)的細胞中以及血清中都有可能有病毒等病原體的存在，有條件的實驗室應該盡量使用生物**柜來進行細胞培養(yǎng)。
超凈臺需要定期檢查，超凈臺的空氣過濾系統(tǒng)也需要定期更換，以保證超凈臺內的潔凈度?？諝膺^濾系統(tǒng)的更換次數可以詢問生產廠家。如果有潔凈度檢測設備的話，可以非常迅速的檢驗超凈臺的潔凈度。如果懷疑細胞培養(yǎng)過程中的污染是由于超凈臺內潔凈度降低引起的，可以用將一個含微生物培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿在超凈臺內敞口放置一段時間，然后在37℃培養(yǎng)的方法來評估。
超凈臺內一般都有紫外線燈用于**。紫外線燈的正確使用方法是在超凈臺使用前打開半小時左右。有的操作人員在不使用超凈臺的時候把紫外線燈一直打開，這樣不但沒有必要，而且會大大縮短紫外線燈的使用壽命。紫外線燈要根據生產廠家的說明定期更換。
超凈臺使用完之后要先用蒸餾水擦拭，然后再用70%酒精擦拭。直接用70%酒精擦拭濺在臺面上的培養(yǎng)液會在不銹鋼臺面上留下難以去除的污漬。
6、一次性細胞培養(yǎng)皿等標明 “TissueCulture Treated”是什么意思?
大部分動物細胞需要貼附在一個固相界面上才能生長。而只有親水的固相界面，細胞才能貼附。
*早的細胞培養(yǎng)器皿是由玻璃制作的。由于玻璃的表面是親水的，不經過特殊的處理，普通的細胞就可以貼附生長。
聚苯乙烯透光性能好，具有較好的強度和易塑性，并且沒有毒性，成為一次性細胞培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等一次性細胞培養(yǎng)耗材的**材料(一般的磁帶和CD盒也是用聚苯乙烯制成的)。然而聚苯乙烯表面是憎水的，所以需要經過表面的改性處理，變成親水后才能適用于細胞培養(yǎng)。
一次性細胞培養(yǎng)皿等標明“Tissue culturetreated”，是表示該器皿經過表面的改性處理，適合貼壁細胞的培養(yǎng)。而懸浮生長的細胞，就不一定需要這樣經過特殊處理過的器皿。但經過表面的改性處理后的細胞培養(yǎng)皿等一般也適合懸浮細胞的培養(yǎng)。
公安機關備案號：
