Abcam抗體之一抗與二抗的選購

如何選擇正確的二抗？

以下指南將幫助您選擇*適合該應(yīng)用的二抗。

常見問題
1. 一抗的宿主物種是什么？

二抗指向一抗的物種。如果使用來源于兔的一抗，則需要來源于除兔以外的其它物種的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG - H&L (HRP) 二抗 (ab6721) 可以檢測(cè)兔多克隆抗 Ki67 一抗 (ab15580)。

2. 需要了解哪些有關(guān)一抗同型的內(nèi)容？

二抗必須指向一抗同型。
多克隆一抗通常來源于兔、山羊、綿羊或驢，并且是IgG 同型。二抗通常為抗 IgG 重鏈和輕鏈的抗體。
單克隆一抗通常來源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果單克隆一抗為小鼠 IgG1，則需要抗小鼠 IgG 或特異性較低的 F(ab) 片段抗小鼠 IgG。
人**球蛋白類、亞類、型和亞型：
類或同型：IgG (γ heavy chains), IgM (μ), IgA (α), IgE (ε), IgD (δ)
亞類： IgG1 (γ1 heavy chains), IgG2 (γ2), IgG3 (γ3), IgG4 (γ4); IgA1 (α1), IgA2 (α2)
型：κ light chain, λ light chain
亞型： λ1, λ2, λ3, λ4

其它類型的反應(yīng)：
多價(jià)抗體與所有**球蛋白類反應(yīng)
抗 Fc 或重鏈 (α, δ, ε, γ, and μ) 抗體僅與重鏈反應(yīng)
抗 F(ab) 或完整分子抗體與重鏈和輕鏈反應(yīng)，而與**球蛋白類無關(guān)
由于所有**球蛋白類均使用相同的 κ 和 λ 輕鏈，因此抗輕鏈（κ 和 λ）抗體與所有**球蛋白類反應(yīng)

3. 需要酶學(xué)或熒光檢測(cè)嗎？

偶聯(lián)類型是依賴于應(yīng)用的。
對(duì)于酶學(xué)和生物素檢測(cè)，例如，在 WB 或 ELISA 中，建議將二抗偶聯(lián)于 HRP, AP 或生物素。不論抗體宿主物種是什麼，抗生物素蛋白和鏈霉親和素與生物素的結(jié)合作用均很強(qiáng)，并且均能使信號(hào)放大。
如果使用了激光，例如，在流式細(xì)胞術(shù)、ICC/IF 或 IHC 中使用時(shí)，則建議將二抗偶聯(lián)于熒光染料進(jìn)行熒光檢測(cè)。

4. 是否需要預(yù)吸附的二抗？

對(duì)于富含**球蛋白的組織和細(xì)胞，通常推薦使用預(yù)吸附血清的二抗于蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用。預(yù)吸附的二抗與內(nèi)源**球蛋白發(fā)生相互作用的可能性較低，因此可降低非特異性背景。二抗進(jìn)行預(yù)吸附時(shí)，預(yù)吸附樣品應(yīng)來源于與檢測(cè)樣品相同的物種。例如，在人組織中檢測(cè)時(shí)，將需要人預(yù)吸附抗體。

5. 是否需要親和純化的抗體或 I****段？

使用親和純化的抗體或 I****段的優(yōu)點(diǎn)將取決于預(yù)期的結(jié)合類型。親和純化的抗體的非特異性結(jié)合量*低，而 I****段包含高親和抗體。事實(shí)上，在親和純化中，高親和力抗體保持固定在基質(zhì)上并且不能被洗脫。

6.有必要使用 F(ab) 或 F(ab')2片段抗體嗎？

F(ab) ) 和 F(ab')2片段抗體消除了抗體 Fc 部分與細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、NK 細(xì)胞和 B 細(xì)胞）上 Fc 受體之間的非特異性結(jié)合，并且由于它們尺寸較小而能夠更有效地滲透組織。由于片段抗體不具有 Fc 部分，因此它們不干擾抗 Fc 介導(dǎo)的抗體檢測(cè)。

7. 是否需要抗 IgG 重鏈和輕鏈、抗輕鏈或抗 F(ab')2 二抗？

我們以不同形式提供二抗：