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細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享

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【養(yǎng)HL60細(xì)胞經(jīng)驗(yàn) ,分條表述】

  • 1.細(xì)胞形態(tài)觀察。細(xì)胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,HL60細(xì)胞的死亡往往是從細(xì)胞膜的破裂開始的,早期的表現(xiàn)就是細(xì)胞膜某一點(diǎn)出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
  • 2.HL60細(xì)胞往往會(huì)有“抱團(tuán)”現(xiàn)象,抱團(tuán)生長(zhǎng)或死亡,個(gè)人認(rèn)為應(yīng)該勤換液或傳代,盡量避免細(xì)胞抱團(tuán)。
  • 3.HL60細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,強(qiáng)烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng),用小瓶養(yǎng)的話,換液不及時(shí),很容易死亡。HL60細(xì)胞的生長(zhǎng)速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
  • 4.培養(yǎng)液:1640培養(yǎng)液,1L一般加碳酸氫鈉2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*佳為12%,*低不低于10%,HL60細(xì)胞對(duì)胎牛血清高度依賴。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。
  • 5.防污染。HL60細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,較少發(fā)生污染,但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無菌操作,酒精**等,培養(yǎng)瓶口建議過火,包括瓶蓋,應(yīng)過火4秒左右。
  • 6.凍存。-20一小時(shí),-80過夜,液氮長(zhǎng)期保存。強(qiáng)烈建議液氮長(zhǎng)期保存,盡量不要在-80長(zhǎng)期保存,死亡率很高。
  • 7.復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液,使培養(yǎng)液溫度與室溫一致。1分鐘內(nèi)融化細(xì)胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內(nèi),動(dòng)作要輕,從試管管底開始慢慢上提移液管,使細(xì)胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻,離心,洗2次。

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逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的NIH3T3細(xì)胞
逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細(xì)胞
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前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系
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人B**細(xì)胞急性白血病細(xì)胞
人B**細(xì)胞瘤細(xì)胞
人B細(xì)胞**瘤細(xì)胞株
人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
人lymphoma B **細(xì)胞
人Ph+急淋白血病細(xì)胞系
人T**瘤細(xì)胞系
 —— 【拜力生物編輯】; 【更新日期】2013-2-28