細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是模擬體內(nèi)生理?xiàng)l件在體外對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存和生長(zhǎng)的一種技術(shù)手段。
1.組織、細(xì)胞的解離方法
1.1 解離組織：在無(wú)菌情況下采取動(dòng)物的組織或器官，放在含有***的平衡鹽溶液(BSS)中，然后盡快在超凈臺(tái)或無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行解離處理。
解離時(shí)應(yīng)注意:
1) 盡可能將脂肪和壞死組織去除干凈；
2) 剪碎組織時(shí)，避免損傷組織塊；
3) 解離組織用的各種酶系，需要先進(jìn)行低速離心。
解離細(xì)胞
常用酶和鰲合劑進(jìn)行解離：
當(dāng)實(shí)驗(yàn)室需要制備具有均勻細(xì)胞層的培養(yǎng)物；
從單個(gè)細(xì)胞出發(fā)獲得細(xì)胞群體；
從一定量的組織中獲得*多的細(xì)胞量時(shí)。
解離細(xì)胞的方法
1）胰蛋白酶解離細(xì)胞法：所需時(shí)間較短，主要缺點(diǎn)是破損細(xì)胞。
2）膠原酶解離細(xì)胞法：這種方法對(duì)解離胚胎性、正常和惡性組織是很有效的。膠原酶*終濃度200u/ml，36.5℃溫育，一般溫育4-48h。膠原酶和透明質(zhì)酸酶協(xié)同作用有助于分離大鼠或兔的肝臟組織。
3）機(jī)械解離細(xì)胞法：比酶法所需時(shí)間短，但細(xì)胞存活率較低。
4）螯合劑解離細(xì)胞法：分離效果差
原代細(xì)胞培養(yǎng)
1）外植塊培養(yǎng)：外植塊在一定限度內(nèi)可保持其原有組織結(jié)構(gòu)，有利于其適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境。短期培養(yǎng)的外植塊成為細(xì)胞培養(yǎng)的材料來(lái)源之一。
2）單層細(xì)胞培養(yǎng)：每隔1~3d換液一次，細(xì)胞長(zhǎng)成單層后傳代培養(yǎng)。
3）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：使細(xì)胞成懸浮狀態(tài)在培養(yǎng)液中連續(xù)生長(zhǎng)。
由于細(xì)胞本身是不粘附的，如小鼠白血病細(xì)胞和腹水腫瘤細(xì)胞；
通過(guò)機(jī)械攪動(dòng)使細(xì)胞保持懸浮狀態(tài)；
通過(guò)選擇培養(yǎng)得到能懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
1）培養(yǎng)液和培養(yǎng)物的比例：一定濃度的培養(yǎng)液僅能支持一定數(shù)量的細(xì)胞生長(zhǎng)，不能盲目增加每單位體積的細(xì)胞濃度。
2）PH：初培養(yǎng)pH應(yīng)為7.4，培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)不低于7.0。
3）培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的空間：一般培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液與液面上的空間體積之比為1:10。
4）容積、深度、表面面積：培養(yǎng)液體積與表面面積的比例為0.2~0.5ml/cm2。需高濃度氧的，在淺的培養(yǎng)液（2mm）中生長(zhǎng)較好；需要低濃度氧的。在深的培養(yǎng)液（5mm）中生長(zhǎng)較好。
5）去除死細(xì)胞
6）溫度控制：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)溫度波動(dòng)的敏感性很大。溫度低于36.5℃，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；溫度高于37.5℃，細(xì)胞存活力降低。
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是模擬體內(nèi)生理?xiàng)l件在體外對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存和生長(zhǎng)的一種技術(shù)手段。
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（animal cell culture）就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng)，動(dòng)物細(xì)胞在單獨(dú)細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中不再形成個(gè)體。
細(xì)胞的全能性不是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)，細(xì)胞的全能性是植物細(xì)胞培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。而動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)及理論基礎(chǔ) http://www.lookbio.com/threestyle/lookbio/secondcatalog/3123712/1.html
公安機(jī)關(guān)備案號(hào)：
