Taqman探針雖然只發(fā)展了短短的幾十年，但是無論在技術上還是在應用上都有了長足的發(fā)展，尤其是配合著細胞生物學，病理學等方面的發(fā)展，應用領域有了很大的延伸。
Taqman定量應用可以分為幾個層次，**個層次自然就是應用到臨床檢測，微生物檢測和食品檢測等方面，**個層次是分子生物學層面的，包括對各種基因的表達進行定量或者半定量的分析(同一基因在不同組織中的表達差異，同一基因在不同**處理后的表達差異，轉基因食品的檢測等)，第三個層次是包括突變分析，等位基因分析，DNA甲基化檢測等在內的遺傳學檢測和單核苷酸多態(tài)性分析。
**個層次：實際檢測應用
這個層面主要是一些微生物檢測，食品檢測，環(huán)境監(jiān)測以及一些醫(yī)學臨床應用(病源體檢測，基因病診斷，傳染病檢測，微小殘留病變檢測等)，在這些方面定量PCR與傳統(tǒng)的方法具有相似的靈敏度，但是耗時少，需要的勞動力也少，而且它們既可以從活著的也可以從死的病原菌中檢測和定量核酸，而傳統(tǒng)的微生物方法只能檢測活的病原菌。
這些主要應用到的就是定量PCR在核酸濃度上的簡單定量，由于之前要想在分子操作過程中知道核酸的濃度，主要應用的方法是瓊脂糖凝膠電泳和分光光度計，但是這兩種方法前者靠主觀判斷，造成的偏差較大;后者很易受樣品中雜質的影響。因此定量PCR由于其靈敏度高、特異性強、無污染性和準確性等特點當然成為了**。
**個層次：分子生物學應用
檢測應用和分子生物學應用都是利用了定量PCR對基因表達的檢測，只不過前者是在臨床實際應用上，而后者則是側重于科學研究。在分子生物學上定量PCR的應用相當廣泛，包括基因轉錄檢測(即同一基因在不同組織中的表達差異)，轉基因生物檢測，腫瘤耐藥基因表達等在內的高通量基因表達檢測(雖然Taqman相對于SYBR Green熒光染料，沒有那么靈活，但是在陸續(xù)各生物技術公司推出一些相應試劑盒，也保證了Taqman在高通量方面的應用)。之前的高通量篩選基因表達差異的技術是cDNA 芯片和差異顯示，但這兩種技術的缺點是只能定性而非完整意義上的定量分析。定量PCR 技術的出現(xiàn)無疑為這種檢測提供了極大的方便，利用定量 PCR檢測產物并進行熔解曲線分析的方法，已經對cDNA 芯片和差異顯示技術的結果進行了確認，而且得到了更加完整和**的結果。
第三個層次：遺傳學，SNP分析以及深入應用
點突變分析和等位基因分析：用不同的熒光報告基團標記的 Taqman探針分別與野生型和突變基因雜交。探針雜交的效率和其后的切除與雜交有關。如果一種染料的熒光信號明顯強于另一種則說明它是一個純合子，如果兩種熒光信號都增加則表明是一個雜合子。實時定量PCR 的數據被標在xy坐標軸上來區(qū)分特異的基因型。利用這種方法，能在不到兩個小時內很快對 96個樣本進行基因分型。這一方法*先由Sevall在文章“Rapid allelic discrimination fromreal-time DNA amplification”中提及。
為了檢測突變體，可以設計兩種不同顏色的探針：一個探針設計來檢測野生型，可以標記FAM，另一個標記JOE的探針來檢測突變體。通常兩個探針的差別只有1個bp，由于兩個探針相差極小，因此一般推薦使用嚴格的反應條件。通過分析數據，兩個通道的結果會呈現(xiàn)在一個屏幕中，沒有標記物的曲線是CH1結果，有循環(huán)數的是CH2，*多可以有四個探針(兩個突變體)可以被分析，在編輯好基因型名稱，將域值調整到0以上后，結果就會在圖下方的表格中顯示出來。
DNA甲基化分析：CG 島內胞嘧啶的甲基化形成 5’-甲基胞嘧啶被認為和許多人類**特別是癌癥有關。Laird等人利用一種被稱作 Methylight 的技術。 Methylight 是一種基于 Taqman 探針的甲基化特異定量 PCR技術。在擴增之前先處理DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman 探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。特異的引物和 Taqman 探針被用來區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA 。和其它實時 PCR 方法一樣，Methylight無需電泳，因而提高了反應的靈敏性和通量。這種方法的靈敏性在食道癌病人血液中癌細胞異常甲基化的DNA檢測中被證明。
低密度表達譜分析：這一方面主要是配合ABI的系列產品：TaqMan® Low DensityArrays。這個芯片是從人，小鼠和大鼠的基因中挑選的4萬個arrays，可以根據用戶要求在反應板中固化不同基因的檢測探針和引物，同時檢測1個標本的384個不同的基因或8個標本的48個不同的基因，而且這個試劑盒是pre-loaded，方便使用，同其反應體積小(2ul)，節(jié)省試劑的優(yōu)點一起構成了這個適用于標準化，中高通量基因表達研究的試劑。
SNP分析：SNPs，即單核苷酸多態(tài)性，這種人類*常見的可遺傳變異占據了所有已知多態(tài)性的90%以上，因此作為研究個體對不同**的易感性或者個體對特定**的不同反應有著重要的意義，也因此國際人類基因研究學會花費大量的資金來完**類單體型圖譜。SNP分析從根本上來說其實就是確定一對染色體的每種基因的兩個拷貝，哪種點突變在這兩個拷貝中存在，因此利用定量PCR方法，并配合芯片技術可以快速靈敏的檢測到SNP結果。ABI號稱有數以千記的定量PCR試劑盒，自然在這方面也不會留下空白，TaqMan SNP Genotyping Assays包含了一百萬的HapMap SNPs(人類單核苷酸多態(tài)性圖譜SNPs)，方便SNP分型高通量研究。
細胞因子分析：細胞因子是一種由細胞分泌、能調節(jié)自身和其他細胞功能的小分子可溶性蛋白質或多肽。這種調節(jié)蛋白主要通過調節(jié)**反應而在**系統(tǒng)中起著核心作用。因此在許多**致病途徑，對細胞因子mRNA表達譜的可靠定量是很重要的。由于受檢樣本中細胞因子含量往往往往都比較低下，因此定量PCR以其高敏感性和準確性在細胞因子的定量中越來越受到青睞。
MicroRNA分析：miRNA這種小分子從2003年一直“火”到了如今，其魅力不可小窺，傳統(tǒng)的檢測和定量miRNA的方法是northern雜交,芯片技術以及核糖核酸酶保護分析(ribonuclease protectionassays)，這些方法都需要標記探針并與純化的RNA進行雜交。但是由于成熟的活性miRNA及其前體有一段相同的靶序列，而基于雜交的各種技術又無法通過分子大小將它們區(qū)分，因此很難專一性的識別成熟miRNA，結果導致很高的前體背景信號，而且這些技術需要標記步驟或放射性同位素，費時，費錢還不討好。利用Taqman技術可以發(fā)揮定量PCR的優(yōu)點來解決這些問題，但是要定量miRNA又一個*大的難題：即小RNA分子太短(-22nt)，無法按常規(guī)設計隨機引物進行反轉錄和實時PCR。ABI提供了一種試劑盒：TaqMan® MicroRNAAssays，設計特異性的莖環(huán)狀反轉錄引物，這樣有兩個好處：專一性的與成熟miRNA結合;形成反轉錄引物/成熟miRNA復合物，并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個較長的反轉錄擴增子，為進一步做實時定量PCR提供了符合要求的摸板。
公安機關備案號：
