激光掃描多光子顯微鏡 的改進優(yōu)勢
激光掃描多光子顯微鏡 是光學顯微鏡的重大改進,主要表現(xiàn)為可以觀察活細胞、固定細胞和組織的深層結構,并且可以得到清晰銳利的多層Z平面結構,即光學切片,并以此可以構建出標本的三維實體結構。共聚焦顯微鏡是采用激光光源,經(jīng)過擴充后充滿整個物鏡后焦平面,然后經(jīng)過物鏡的透鏡系統(tǒng),在標本的焦平面上會聚成非常小的點。根據(jù)物鏡數(shù)值孔徑不同,*亮照明點直徑大小約0.25 ~ 0.8μm,深度約0.5 ~ 1.5μm。共聚焦點大小決定于顯微鏡設計、激光波長、物鏡特性、掃描單元狀態(tài)設定和標本性質。場式顯微鏡的照明范圍和照明深度都很大,而共聚焦顯微鏡的照明則集中到焦平面上的一個**的焦點上。共聚焦顯微鏡*基本的優(yōu)點是可以對厚熒光標本(可以達到50 μm或以上)進行精細的光學切片,切片的厚度約為0.5到1.5μm。系列光學切片圖像可以通過**的顯微鏡Z軸步進馬達上下移動標本獲得。圖像信息的采集被控制在**的平面內,而不會被位于標本上其他位置發(fā)出的信號干擾。在去除背景熒光影響和增加信噪比后,共聚焦圖像的對比度和分辨率比傳統(tǒng)場式照明熒光圖像有明顯的提高。在很多標本中,許多錯綜的結構成分相互交織構成復雜的系統(tǒng),但是一旦能夠采集到足夠的光學切片,我們就能通過軟件對其進行三維重建。這種實驗方法已經(jīng)被廣泛應用于生物學研究中,用來闡明細胞或組織之間復雜的結構和功能關系。
激光掃描多光子顯微鏡 是光學顯微鏡的重大改進,主要表現(xiàn)為可以觀察活細胞、固定細胞和組織的深層結構,并且可以得到清晰銳利的多層Z平面結構,即光學切片,并以此可以構建出標本的三維實體結構。共聚焦顯微鏡是采用激光光源,經(jīng)過擴充后充滿整個物鏡后焦平面,然后經(jīng)過物鏡的透鏡系統(tǒng),在標本的焦平面上會聚成非常小的點。根據(jù)物鏡數(shù)值孔徑不同,*亮照明點直徑大小約0.25 ~ 0.8μm,深度約0.5 ~ 1.5μm。共聚焦點大小決定于顯微鏡設計、激光波長、物鏡特性、掃描單元狀態(tài)設定和標本性質。場式顯微鏡的照明范圍和照明深度都很大,而共聚焦顯微鏡的照明則集中到焦平面上的一個**的焦點上。共聚焦顯微鏡*基本的優(yōu)點是可以對厚熒光標本(可以達到50 μm或以上)進行精細的光學切片,切片的厚度約為0.5到1.5μm。系列光學切片圖像可以通過**的顯微鏡Z軸步進馬達上下移動標本獲得。圖像信息的采集被控制在**的平面內,而不會被位于標本上其他位置發(fā)出的信號干擾。在去除背景熒光影響和增加信噪比后,共聚焦圖像的對比度和分辨率比傳統(tǒng)場式照明熒光圖像有明顯的提高。在很多標本中,許多錯綜的結構成分相互交織構成復雜的系統(tǒng),但是一旦能夠采集到足夠的光學切片,我們就能通過軟件對其進行三維重建。這種實驗方法已經(jīng)被廣泛應用于生物學研究中,用來闡明細胞或組織之間復雜的結構和功能關系。