抗體親和力大小可以用親和力常數(shù)KD (升/質(zhì)量摩爾濃度)表示,計(jì)算公式為:
KD=[Ab?H]/([Ab][H])
其中[]表示摩爾濃度,Ab表示抗體,H表示半抗原,Ab?H表示抗體與半抗原的結(jié)合物。
親和力常數(shù)KD越高,則抗體結(jié)合半抗原的能力越強(qiáng)。
抗體親和力的強(qiáng)弱取決于抗體對(duì)位與所用抗原表位之間的配合程度,包括接觸面積的大小、親和程度以及帶點(diǎn)基團(tuán)與疏水基因的分布等??贵w親和力體現(xiàn)了一個(gè)抗體分子和抗原分子或半抗原的一個(gè)決定簇起反應(yīng)的能力。是評(píng)價(jià)抗體質(zhì)量的重要指標(biāo),反應(yīng)了抗體與相應(yīng)抗原之間的結(jié)合力度。親和力越高,抗體與相應(yīng)的抗原之間的結(jié)合程度越高,對(duì)抗體的應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)作用。
生物膜干涉技術(shù)(BLI)是一種免標(biāo)記技術(shù),通過實(shí)時(shí)檢測(cè)光干涉信號(hào)的變化來實(shí)現(xiàn)親和力的檢測(cè),能夠?qū)崿F(xiàn)實(shí)時(shí)提供高通量的生物分子相互作用信息,具有高靈敏度、高檢測(cè)通量及較低的樣品要求等優(yōu)點(diǎn)。它不僅可以用于早期的**和篩選以及晚期的臨床試驗(yàn),還可以用于**監(jiān)控和質(zhì)量監(jiān)控。
BLI實(shí)驗(yàn)原理為:利用光學(xué)干涉原理,在Fortebio Octet儀器的生物傳感器底端存在生物分子相容層,當(dāng)一束可見光從光譜儀射出后,在傳感器末端的光學(xué)膜層的兩個(gè)界面會(huì)形成兩束反射光譜,并形成一束干涉光譜。隨著生物分子的結(jié)合或解離,形成的膜層厚度和密度也發(fā)生變化,生物膜厚度的變化導(dǎo)致干涉光波發(fā)生相位移動(dòng)。利用Fortebio Octet儀器捕獲干涉光譜,并通過這個(gè)位移值做出實(shí)時(shí)的反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖譜。
通過BLI技術(shù)可以進(jìn)行相應(yīng)的抗體表征、抗體與蛋白等不同分子的親和力檢測(cè)等服務(wù),能夠滿足藥wu**的多方面需求,在藥wu篩選,醫(yī)療診斷,免yi學(xué)研究,抗體工程等領(lǐng)域都有著廣泛應(yīng)用。