ELISA標(biāo)曲顯色過(guò)強(qiáng)無(wú)明顯梯度:

1、主要懷疑點(diǎn)：洗板不充分：

1.1、機(jī)器洗版：確保機(jī)器設(shè)置的針頭能吸干孔中液體，并且加液針頭能加液大于350ul，加液針頭沒(méi)有被異物或者結(jié)晶鹽堵住。

1.2、手動(dòng)洗板，嚴(yán)格按照步驟，使用干凈滅 菌的槍頭和加樣槽，使用無(wú)氧化劑的吸水紙。加350ul洗液，靜置90秒，在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。

1.3、特別注意，在加入TMB前的洗板步驟極其重要，殘留的HRP酶會(huì)直接導(dǎo)致TMB顯色。

2、次要懷疑點(diǎn)：

2.1、TMB 已經(jīng)污染，檢測(cè)TMB是否透明無(wú)色，如果偏藍(lán)就是污染了。

2.2、檢查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是雙蒸水，三蒸水或無(wú)離子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等過(guò)渡金屬，以及HClO都會(huì)氧化TMB。

2.3、酶標(biāo)板受潮，長(zhǎng)霉，或者試劑過(guò)期。

2.4、環(huán)境污染，空氣中有導(dǎo)致顯色的物質(zhì)或者粉塵。