PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))通常包括實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,其區(qū)別如下:
實(shí)驗(yàn)組:該組是進(jìn)行PCR擴(kuò)增的樣本組。實(shí)驗(yàn)組是需要進(jìn)行檢測(cè)或者分析的樣品,其PCR擴(kuò)增反應(yīng)中包含需要檢測(cè)的基因、DNA或RNA等物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)組在PCR反應(yīng)中需要添加特異性引物以擴(kuò)增需要檢測(cè)的物質(zhì),依據(jù)PCR擴(kuò)增的結(jié)果進(jìn)行后續(xù)的分析和判斷。
對(duì)照組:該組是為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組用途、確立PCR反應(yīng)條件以及排除干擾因素而設(shè)立的對(duì)照組。一般,對(duì)照組可分為正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組:
- 正對(duì)照組:含有已知的目標(biāo)序列或標(biāo)準(zhǔn)品。它的目的是驗(yàn)證PCR反應(yīng)體系是否能正常工作、引物是否正確、PCR擴(kuò)增條件是否設(shè)定正確等。正對(duì)照物可以是基因片段、質(zhì)粒DNA、RNA、cDNA等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。- 負(fù)對(duì)照組:該組反應(yīng)體系中不含特定的目標(biāo)序列或基因片段,是一種陰性對(duì)照。它的主要作用是排除可能存在的污染、假陽性或假陰性等錯(cuò)誤。負(fù)對(duì)照組在PCR反應(yīng)中應(yīng)用純化的水(或緩沖液+酶)代替樣品,進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)組完全一致的PCR反應(yīng),以確認(rèn)任何陽性信號(hào)的來源。
通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的PCR反應(yīng)結(jié)果,可以進(jìn)行正式數(shù)據(jù)分析和判斷。在實(shí)驗(yàn)的過程中,對(duì)照組是進(jìn)行PCR擴(kuò)增和檢測(cè)過程中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié),有效地避免了實(shí)驗(yàn)誤差和假陽性、假陰性等錯(cuò)誤。