冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：LS174T是LS180(ATCCCL187)結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的胰蛋白酶化變種。它比親本更易傳代，象LS180一樣**大量的癌胚抗原(CA-A)。電鏡研究表明有豐富的微絲和細(xì)胞質(zhì)粘液素液泡。直腸抗原3陽性。p53抗原表達(dá)陰性，但mRNA表達(dá)陽性。與ATCCCL-187來源于同一個腫瘤。LS174T細(xì)胞角蛋白染色陽性。癌基因CS-myc,N-myc,H-ras,N-ras,Myb,和fos的表達(dá)呈陽性。癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測。

培養(yǎng)條件：DME

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

磺酰 98%Cr(Human Crosslaps) ELISA Kit  人骨膠原交聯(lián)兔腸三葉肽因子3(TFF3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性炭 AR，200目，粉末狀，褐色C I CP(Human cross-linked C-opeptides of Type I collagen) ELISA Kit  人Ⅰ型前膠原C末端肽兔X型膠原(COL10)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性炭 CP，200目，粉末狀，褐色DPD(Human deoxypyridinoline) ELISA Kit  人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉兔纖溶酶原激活物抑制因子2(PAI2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

亞二乙酯 99%PY(Human pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit  人吡啶交聯(lián)物兔STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

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2,6-二芐 分析標(biāo)準(zhǔn)品SP-R(Human substance P receptor) ELISA Kit  人P物質(zhì)受體兔內(nèi)皮素1(ET-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-氟芐 98%cGMP(Human Cyclic guanosine monophosphate) ELISA Kit  人環(huán)鳥苷兔前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(PTGS1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-氧酰 97%Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit  人脂蛋白脂酶A2兔孕相關(guān)內(nèi)膜蛋白(PAEP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

環(huán)戊 Standard for GC，>99.5%（GC)EL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit  人內(nèi)皮脂肪酶兔顆粒酶K(GZMK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

環(huán)戊 99%sm Actinin- Alpha(Human skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit  人橫紋肌輔肌動蛋白α兔剪切修復(fù)交叉互補(bǔ)因1(ERCC1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-氨-5-氟吡啶 97%BMP-7(Human Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit  人骨成型蛋白7兔趨化因子C-C-元配體1(CCL1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

一酮 96%(劇品)25(OH)D3/25 HVD3(Human 25-Dihydroxy vitamin D3)ELISA Kit  人25羥維生素D3兔血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

(RS)-1H-吲哚-2-羧 97%LTB4(Human Leukotriene B4) ELISA Kit  人白三烯B4兔纖維膠凝蛋白1(FCN1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

異 98%iFABP(Human intestinal fatty acid binding protein) ELISA Kit  人腸脂肪結(jié)合蛋白兔優(yōu)球蛋白(EL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LS174T神經(jīng)肽Y受體Y1Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgGPAX8  配對盒因8抗體

神經(jīng)肽Y受體Y2Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的羊抗雞IgGPAX7  配對盒因7抗體

連蛋白抗體Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的羊抗雞IgGPAX6  轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體

蛋白酶3抗體Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgGPAX5  配對盒因5抗體

M型脂酶A2受體抗體Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgGPAX4  配對盒同源因4抗體

神經(jīng)肽Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgGPAX3  配對盒因3抗體

組蛋白H1Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的羊抗人IgGPAX2  配對盒因2抗體

胸腺肽β4Elisa試劑盒PE標(biāo)記的羊抗人IgGPAX1  配對盒因1抗體

胰島素樣生長因子2-mRNA結(jié)合蛋白2Elisa試劑盒生物素標(biāo)記的羊抗人IgGPATZ1  轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。