冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品名稱
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結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞;NCI-H508[H508]
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規(guī)格
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T25
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貨號
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FS-X3222
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生長特性:貼壁生長
培養(yǎng)條件:RPMI1640+10%FBS
傳代方法:1:2傳代
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
公司優(yōu)勢:
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蘇丹 Biological stainPKA(Human Protein kinase A) ELISA Kit 人蛋白激酶A兔去唾液糖蛋白受體1(ASGR1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞;NCI-H508[H508]17β羥類固脫氫酶Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgGPAP2B 脂酶2b抗體
假尿苷合酶5Elisa試劑盒堿性酶(AP)標(biāo)記的小鼠抗人IgGPAP1/Acid Phosphatase 性酶抗體
假尿苷合酶6Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgGPan-ras Pan ras抗體
轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員6Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgGPANK4 泛激酶4抗體
90kDa熱休克蛋白β1Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgGPANK3 泛激酶3抗體
HBsAg-preS1Elisa試劑盒PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgGPANK2 泛激酶2抗體
組織蛋白酶VElisa試劑盒PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgGPANK1 泛激酶1抗體
氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶線粒體F1復(fù)合體β肽Elisa試劑盒Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgGPancreatic Lipase 胰脂肪酶抗體
CD24分子Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgGPancreatic Amylase 胰淀粉酶抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。