實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
產(chǎn)品名稱
|
規(guī)格
|
貨號
|
NCI-H226細(xì)胞
|
T25
|
FS-X3243
|
產(chǎn)品名稱:肺鱗癌細(xì)胞;NCI-H226
形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:1980年分離建立。
培養(yǎng)條件:RPMI1640+10%FBS
傳代方法:1:2傳代
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu),可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
2-溴酰溴 97%CLEC4E(Human C-type lectin domain family 4 member e) ELISA Kit 人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E兔巨噬清道夫受體1 (MSR1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
粘 99%Human Hypothetical protein LOC677168 ELISA Kit 人假定蛋白LOC677168兔轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
酰溴 95%Ly6a(Human lymphocyte antigen 6 complex locus A) ELISA Kit 人抗原6復(fù)合物因座A兔褪黑素(MT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
皂土(膨潤土) Bentone SD-1,適于中至低性溶劑EAR1(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 1) ELISA KIT 人嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1兔趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
皂土(膨潤土) Bentone SD-2,適于中高性溶劑MLKL(Human mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit 人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域兔蛋白激酶抑制劑α(PKIα )酶聯(lián)吸附測定試劑盒
BENTONE 27,應(yīng)用在中等到高等性溶劑PPARGC1(Human peroxisome proliferative activated receptor gama coactivator 1 alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α兔唾液結(jié)合球蛋白樣凝集素10(SIGLEC10)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
皂土(膨潤土) BENTONE 38,應(yīng)用在性溶劑體系中human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit 人類似cDNA順序BC027382兔多功能蛋白聚糖(VS)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
鋅粒 99.99% metals basishuman similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit 人類似RIKEN cDNA 4931408D14 因兔胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
二二硒 99%RCOR3(Human REST corepressor 3) ELISA Kit 人REST協(xié)阻抑因子3兔血管緊張素I受體抗體(ANG I R-Ab)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
鳥嘌呤 99%COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit 人集蛋白亞家族成員11兔麥考酚(MPA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
鳥嘌呤鹽鹽 ≥99.0% (HPLC)Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit 人α1β糖蛋白兔尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
6-硫鳥嘌呤 98%sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit 人可溶性髓系觸發(fā)受體-1兔狀腺素抗體(TAb)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
0.98MSTN(Human Myostatin) ELISA Kit 人肌抑素兔活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
≥99.5% (HPLC)MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生亮氨拉鏈額外核因子兔血小板衍生生長因子亞A(PDGFA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
秋水仙堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(HPLC)UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit 人二尿核苷葡糖轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4兔α-骨膠原交聯(lián)(α-CTx)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
NCI-H226細(xì)胞融合蛋白Elisa試劑盒PE標(biāo)記的兔抗牛IgGNT5C2 胞漿-5′-核苷酶-Ⅱ抗體
去泛素化酶Elisa試劑盒PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgGNT5C1A 胞質(zhì)5'核苷酶1A抗體
去泛素化酶Elisa試劑盒PE-CY5標(biāo)記的兔抗牛IgGNT-4/NT-5 神經(jīng)生長因子4/5抗體
二氫生物蝶呤Elisa試劑盒APC標(biāo)記的兔抗牛IgGNT-3 proprotein 神經(jīng)營養(yǎng)因子-3前蛋白抗體
泛素蛋白Elisa試劑盒Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgGNT-3 神經(jīng)營養(yǎng)因子3抗體
蘋果脫氫酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgGNT/NTS1/NTRH 神經(jīng)降壓素抗體
CC趨化因子受體3Elisa試劑盒Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgGNSPL2/RTN3 神經(jīng)特異性蛋白2抗體
α-糖苷酶Elisa試劑盒PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgMNSP5 核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體
輪狀病抗體Elisa試劑盒PE-CY5標(biāo)記的兔抗牛IgMNSP1/SH2D3A SH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。