實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H1650
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：該細(xì)胞是從一名27歲白人男性（10年煙齡）支氣管肺泡癌患者的胸腔積液中分離得到的。

培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS

傳代方法：1:4~1:6傳代；2~3天換液1次。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
L-3-三氟氨 96%APCR(Human activated protein C resistance) ELISA Kit  人活化蛋白C抵抗素兔脂蛋白關(guān)聯(lián)脂酶A2(LpPLA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-(三氟)-D-氨 98%Ext-N(Human N-terminal extein) ELISA Kit  人N端外顯肽兔間粘附分子4(ICAM-4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

L-4-三氟氨 99%SC(Human secretory component) ELISA Kit  人成分兔纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

D-2-三氟氨 98%ADP(Human Adenosine diphosphate) ELISA Kit  人二腺苷兔肌腱蛋白X(TNX)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-(三氟)-L-氨 98%PG(Human Proteoglycan) ELISA Kit  人蛋白聚糖兔色素P450氧化還原酶(CPR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

6-巰嘌呤 99.5%PYD(Human Pyridinoline) ELISA Kit  人吡啶酚兔平滑肌肌球蛋白(SMM)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

6-巰嘌呤 98%5-HIAA(Human 5-hydroxyindolacetic acid) ELISA Kit  人5羥吲哚乙兔糖化血紅蛋白(HbA1c)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

10-十一烯 95%12-HETE(Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid) ELISA Kit  人12羥二十烷四烯兔脂蛋白a(LP-a)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

10-十一烯 98%Hyp(Human hydroxyproline) ELISA Kit  人羥脯氨兔促狀腺素釋放(TRH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性氧化鋁 40-60目 GCNO(Human nitric oxide) ELISA Kit  人一氧化氮兔角蛋白20(CK20/KRT20)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性氧化鋁 60-80目 GCENA-78/CXCL5(Human Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  人上皮中性?；罨?8兔G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白4(RGS4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性氧化鋁 80-100目 GCVC(Human Vitamin C) ELISA Kit  人維生素C兔狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3A分子篩 20-40目,氣相、液相色譜柱VB6(Human Vitamin B6) ELISA Kit  人維生素B6兔大腸癌專一抗原4(CCSA-4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3A分子篩 40-60目,氣相、液相色譜柱sP-selectin(Human soluble P-selectin) ELISA Kit  人可溶性P選擇素兔內(nèi)皮糖蛋白(ENG/CD105)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3A分子篩 60-80目,氣相、液相色譜柱TIMP-1(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1) ELISA Kit  人質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1兔III型膠原交聯(lián)羧端肽(CTX-III)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
NCI-H1650細(xì)胞心肌肌鈣蛋白CElisa試劑盒PE-Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgMNOX4/NADPH oxidase 4  NADPH氧化酶4抗體

前列腺癌抗原3Elisa試劑盒PE-CY5標(biāo)記的兔抗雞IgMNox4/NADH  NADPH氧化酶4抗體

α-酰輔酶A消旋酶Elisa試劑盒APC標(biāo)記的兔抗雞IgMNox3/NADPH oxidase 3  NADPH oxidase 3抗體

晶狀體上皮源性生長因子Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗狗IgGNOX2/gp91phox  NADPH氧化酶2抗體

前列腺特異性膜抗原Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的兔抗狗IgGNox1/NADPH oxidase 1  有絲分裂氧化酶1抗體

氨肽酶NElisa試劑盒膠體金標(biāo)記的兔抗狗IgGNotch3/4  跨膜受體蛋白Notch-3抗體

脂酰輔酶AElisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的兔抗狗IgGNotch1/MOTC  跨膜受體蛋白Notch-1抗體

精氨脫亞氨酶Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗狗IgGNotch 2  跨膜受體蛋白Notch-2抗體

粘蛋白4Elisa試劑盒生物素標(biāo)記的兔抗狗IgGNOS-3/eNOS  一氧化氮合成酶-3抗體（內(nèi)皮型）
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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