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產(chǎn)品名稱：低轉(zhuǎn)移肝癌細胞；MHCC97-L
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：來源于中山醫(yī)院，生長較緩慢

培養(yǎng)條件：DMEM/F12+10%FBS

傳代方法：1：2傳代
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

鎢 94%CT-1 ELISA Kit  大鼠心肌營養(yǎng)素1兔XC趨化因子受體1(XCR1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-戊炔-1- 97%Alpha-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit  大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA兔微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

五氟酚 99%Lp- Alpha ELISA Kit  大鼠脂蛋白α兔α肌動蛋白(α Actin)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

吡啶-2，5-二羧 98%F VIII -Ag ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原兔催產(chǎn)素受體(OTR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

酯 99%FIX ELISA Kit  大鼠凝血因子IX兔胰島素樣蛋白3(INSL3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1--1-丁炔 99%F X ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅹ兔胰腺再生蛋白3γ(REG3γ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1--1-炔 99%VWF ELISA Kit  大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子兔GTP酶活化蛋白(GAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

2--2- 97%PAP ELISA Kit  大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物兔鈣非依賴性脂酶A2(iPLA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-(氨)吡啶 99%TAT ELISA Kit  大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物兔成纖維生長因子4(FGF4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鐠(III) 99.9% metals basisATR ELISA Kit  大鼠抗凝血酶受體兔組織蛋白酶D(CTSD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

鉬 AR,98.0 %TR ELISA Kit  大鼠凝血酶受體兔天門冬氨氨轉(zhuǎn)移酶(AST)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鉬 99.9%cTn- I ELISA Kit  大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ兔晚期糖化終末產(chǎn)物受體(AGER)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

乙酯 99%PI3K ELISA Kit  大鼠肌3激酶兔生長分化因子6(GDF6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

非那西汀 ≥98.0% (HPLC)PKB ELISA Kit  大鼠蛋白激酶B兔纖維蛋白原β(FGβ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雙(硅烷)氨 0.7M in toluene(15%溶液)sIgA ELISA Kit  大鼠型球蛋白A兔II型膠原交聯(lián)羧端肽(CTX-II)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
MHCC97-L細胞趨化因子配體27Elisa試劑盒Cy5.5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgG

3-溴酪氨Elisa試劑盒Cy7標記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的小鼠抗兔IgG

間變性瘤激酶Elisa試劑盒Cy3標記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗兔IgG

球蛋白抗體Elisa試劑盒Cy5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE  PE標記的小鼠抗兔IgG

氨肽酶NElisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/HRP  辣根過氧化物酶標記的小鼠抗兔IgG

內(nèi)皮微粒水平Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標記的小鼠抗兔IgG

神經(jīng)酰酶Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/FITC  FITC標記的小鼠抗兔IgG

前腦鈉素Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7標記的小鼠抗兔IgG

緊密連接蛋白2Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的小鼠抗兔IgG