實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：張氏肝細(xì)胞；Changliver
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：張氏肝細(xì)???1954年從非惡性的人體組織中建立。廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)、生化和惡性腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)移研究。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
4-吡啶硫脲 98%SP ELISA Kit  大鼠P物質(zhì)兔型球蛋白A(sIgA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鄰-(2,3,4,5,6-五氟芐)羥鹽鹽 99%,用于GCAFU ELISA Kit  大鼠αL巖藻糖苷酶兔高爾蛋白73(GP-73)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

DL-3--2-羥 ≥98.0%TPO ELISA Kit  大鼠狀腺過氧化物酶兔過氧化物酶體膜蛋白3(PMP3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-氧磺酰 97%PI ELISA Kit  大鼠胰島素兔血管舒緩激肽(BK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

(S)-(-)-1-乙 99%大鼠抗IgE受體抗體ELISA Kit  大鼠抗IgE受體抗體兔尿嘧啶核苷化酶1(UPP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-戊二 98%大鼠抗IVIgG抗體ELISA Kit  大鼠抗IVIgG抗體兔半凝集素4(GAL4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

炔 97%P53 ELISA Kit  大鼠P53兔胰腺再生蛋白3α(REG3α)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

DL-青霉 98+%cGMP ELISA Kit  大鼠環(huán)鳥苷兔心肌鈣黏蛋白(H-Cadherin)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

DL-青霉 GRNOS ELISA Kit  大鼠一氧化氮合成酶兔色素P450家族成員1A1(CYP1A1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-(1-) 97%iNOS ELISA KIT   大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶兔質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

喹啉-2- 98%eNOS ELISA Kit  大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶兔低密度脂蛋白受體(LDLR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

D-(-)-奎尼 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Lp-PL-A2 ELISA Kit  大鼠脂蛋白脂酶A2兔端錨聚合酶2 (TNKS2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

喹啉-5-羧 98%HSP-90 ELISA Kit  大鼠熱休克蛋白90兔甘露糖受體C2 (MRC2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

利英鈉克鹽 ARHSP-70 ELISA Kit  大鼠熱休克蛋白70兔甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨蛋白酶(MASP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

利英鈉克鹽 ACSHSP-40 ELISA Kit  大鼠熱休克蛋白40兔髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白(MOG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Changliver細(xì)胞藍(lán)氏賈弟鞭毛蟲IGG抗體Elisa試劑盒β淀粉樣肽1-28（多肽蛋白）Mouse anti-rabbit IgG ascites  小鼠抗兔IgG腹水

20-a羥孕酮Elisa試劑盒β淀粉樣肽（1-40）（多肽蛋白）Mouse Anti-rabbit IgG  小鼠抗兔IgG

H5N1-IgG抗體Elisa試劑盒突變型β淀粉樣肽1-40Mouse Anti-human IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgM

H5N1-IgM抗體Elisa試劑盒β淀粉樣肽（1-42）Mouse Anti-human IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgM

KH型剪接調(diào)節(jié)蛋白Elisa試劑盒糖尿病相關(guān)肽（胰島淀粉樣肽）Mouse Anti-human IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgM

星狀病IGM抗體Elisa試劑盒瓜氨環(huán)肽Mouse Anti-human IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgM

肌腱蛋白NElisa試劑盒2型豬鏈球體蛋白Mouse Anti-human IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgM

肌腱蛋白XElisa試劑盒胰高血糖素樣肽-1（多肽）Mouse Anti-human IgM/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗人IgM

神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白BElisa試劑盒腎上腺髓質(zhì)素蛋白(N端20肽)Mouse Anti-human IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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