產(chǎn)品名稱：永生化肝細胞;C3A
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

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凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

三銀 98%TFPI ELISA Kit  大鼠組織因子途徑抑制物兔腫瘤特異性移植抗原(TSTA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

檸檬氫二鈉 99%AQP-5 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白5兔類粘蛋白2(ORM2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硫銀 99%AQP-4 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白4兔腎上腺素能α1A受體(ADRA1A)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

血清鹽鹽 ARAQP-3 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白3兔泛素結(jié)合酶E2A(UBE2A)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

溴化銀 99.9%AQP-2 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白2兔凝血酶原(PT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

溴化銀 98%AQP-1 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白1兔內(nèi)脂素(VF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鉻鈉，四水 GR，99%AQP-0 ELISA Kit  大鼠水通道蛋白0兔外信號調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-磺 水合物 98%TG ELISA Kit  大鼠狀腺球蛋白兔胰高血糖素(GC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

碳鈉,一水 ACSINH-A ELISA Kit  大鼠抑制素A兔IgA Fc片段受體(FcaR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銀 銀含量, 77.0 % Beta-CG ELISA Kit  大鼠絨毛膜促性腺β兔瘦素受體(LEPR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鹽肌氨 99%SHBG ELISA Kit  大鼠性結(jié)合球蛋白兔環(huán)氧合酶-2受體(COX-2R)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

碳鈉,一水 99.999% metals basisDHEA-S7 ELISA Kit  大鼠脫氫表雄酮S7兔腦素受體(CNR1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硫釤(III),八水 99.9% metals basisDHEA ELISA Kit  大鼠脫氫表雄酮兔顆粒酶A(GzmA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

間 99%HMGB-1 ELISA Kit  大鼠高遷移率族蛋白B1兔抗環(huán)胍氨肽抗體(ACCPA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-(三氟)肼 96%PAPP-A ELISA Kit  大鼠相關(guān)血漿蛋白A兔胸腺肽α1(Ta1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
C3A細胞高遷移率族AT Hook蛋白2Elisa試劑盒牛血清白蛋白（標(biāo)準(zhǔn)）Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgM

脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白2Elisa試劑盒髓鞘堿性蛋白(多肽）大鼠Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgM

Notch同源物3Elisa試劑盒血管活性腸肽Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgM

溶血卵脂酰轉(zhuǎn)移酶2Elisa試劑盒神經(jīng)節(jié)肽Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgM

食道癌相關(guān)因2Elisa試劑盒胰高血糖素樣肽-2蛋白Mouse anti-human IgM ascites  小鼠抗人IgM腹水

固調(diào)節(jié)因子結(jié)合蛋白1Elisa試劑盒活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原）Mouse Anti-human IgM  小鼠抗人IgM

乙酰輔酶A羧化酶αElisa試劑盒α-1抗胰糜蛋白酶Mouse Anti-human IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgG

CARD結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)顆粒樣蛋白Elisa試劑盒胰糜蛋白酶Mouse Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG

Crk樣蛋白Elisa試劑盒促腎上腺皮質(zhì)（18-39）(抗原)Mouse Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG