冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：肝竇狀小管內(nèi)皮細(xì)胞；HHSEC
培養(yǎng)條件：平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基，scienCA-ll，貨號：1101

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

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秦皮素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>99%MMP-8 ELISA Kit  大鼠質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒膠原酶豚鼠黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

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木犀草素  ≥98% (HPLC)ANG-R-Tie1 ELISA Kit  大鼠血管**素受體Tie1豚鼠戊糖素(PTD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

芒果苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Tie-2 ELISA Kit  大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激酶2豚鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

柚皮苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%TIMP-2 ELISA Kit  大鼠質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2豚鼠色氨酰tRNA合成酶(WARS)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HHSEC細(xì)胞可溶性IgA-Fc斷片受體Elisa試劑盒水通道蛋白-2（抗原）Mouse Anti-Goat IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

抗IgM抗體Elisa試劑盒腺苷三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗原Mouse Anti-Goat IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

鈣黏著蛋白3Elisa試劑盒組織因子途徑抑制劑Mouse Anti-Goat IgG/Bio  生物素標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

封閉蛋白3Elisa試劑盒葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12Mouse Anti-Goat IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

硫酯酶1Elisa試劑盒表皮生長因子受體III型突變體抗原Mouse Anti-Goat IgG/AP  堿性酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

維受體應(yīng)答因1Elisa試劑盒CD26抗原Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3Elisa試劑盒三腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

Adp; ATP載體抗體Elisa試劑盒心肌特異性肌鈣蛋白TMouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗羊IgG

β1受體抗體Elisa試劑盒 β酶（抗原）Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗羊IgG
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。