冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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HEp-2細(xì)胞
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規(guī)格
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T25
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貨號(hào)
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FS-X3315
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產(chǎn)品名稱(chēng)：喉表皮樣癌細(xì)胞；HEp-2
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
特征特性：初認(rèn)為這個(gè)細(xì)胞源自喉上皮癌，但隨后通過(guò)同功酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，起源細(xì)胞已被HeLa污染。角蛋白過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。
培養(yǎng)條件：RPMI-1640(GIBCO,添加NaHCO31.5g/L,glucose2.5g/L,SodiumPyruvate0.11g/L)，80%；胎牛血清，20%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
傳代方法：1:2傳代
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
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HEp-2細(xì)胞跨膜受體蛋白Notch-2Elisa試劑盒降鈣素（抗原）MMP-23 質(zhì)金屬蛋白酶23抗體
Ⅴ型膠原α2Elisa試劑盒降鈣素受體（抗原）MMP-22 質(zhì)金屬蛋白酶22抗體
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O-連鎖-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移酶Elisa試劑盒色素 C（抗原）MMP20 質(zhì)金屬蛋白酶20
DNA轉(zhuǎn)移酶3LElisa試劑盒腎上腺素能受體β3MMP-2 質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體
口腔癌致病因BPIFB2Elisa試劑盒巨化病(多肽)MMP-2 質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體
錨蛋白Elisa試劑盒多巴脫羧酶（抗原）MMP-2 質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體
脫氫酶3家族成員A1Elisa試劑盒人表皮生長(zhǎng)因子受體-8（多肽片斷抗原）MMP19 質(zhì)金屬蛋白酶18/19
腎小管間質(zhì)腎炎抗原Elisa試劑盒α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原MMP-17 質(zhì)金屬蛋白酶-17抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀(guān)察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。
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