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產(chǎn)品名稱：惡性橫紋肌肉瘤；PLA-802
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

氨蝶呤 水合物 USPAFP-L3 ELISA Kit   小鼠小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3豚鼠補體成分5(C5)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

6-巰嘌呤 99.5%AFP-L2 ELISA Kit   小鼠小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2豚鼠糖鏈抗原153(CA153)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

6-巰嘌呤 98%AFP-L1 ELISA Kit   小鼠小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1豚鼠線粒體肌激酶1B(CKMT1B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

磺嘧啶銀 98%MHB ELISA Kit   小鼠高鐵血紅蛋白豚鼠熱休克蛋白60(HSP-60/HSPD1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

分析標準品，C:71.09%,H:6.71%,N:10.36%CTX-2 ELISA Kit   小鼠骨退化特異標志物豚鼠內(nèi)皮抑制素(ES)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鋁標準溶液 100μg/mL，體:5%HClCTX- I ELISA Kit  小鼠Ⅰ型膠原C端肽豚鼠B瘤因子2(Bcl-2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銻標準溶液 100mg/L(20°C)，體: 20%HClOMgp-Ab ELISA Kit   小鼠少突膠質(zhì)髓鞘糖蛋白抗體豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

莧菜紅標準溶液0.5mg/ml,溶劑:水MUC5B ELISA Kit   小鼠粘蛋白/粘液素5B豚鼠鳥氨氨酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

草標準溶液 549mg/L，體：PACAP ELISA Kit   小鼠垂體腺苷環(huán)化酶激活肽豚鼠催素(PRL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

砷標準溶液 100μg/mL，體：1%HNO3ssDNA ELISA Kit   小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體豚鼠脂質(zhì)運載蛋白1(LCN1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

砷標準溶液 0.500μg/g，體：0.2%(v/v)H2SO4，K+2.2mg/L，Na+2PS ELISA Kit   小鼠脂酰絲氨豚鼠促胰液素/素受體(SCTR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

烯標準溶液 1.01mg/ml，體：純水PC/CPG ELISA Kit   小鼠膽堿甘油酯豚鼠生長因子受體結(jié)合蛋白7(Grb7)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

阿特拉津 分析標準品,99.9%I CTP ELISA Kit  小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧末端肽豚鼠Corin蛋白(CRN)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

敵靈標準溶液1.00mg/ml,溶劑:乙Mouse Anti-nuclear Antibody,ANA ELISA Kit  小鼠抗核抗體豚鼠白三烯A4水解酶(LTA4H)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雙脒 分析標準品，99.9%KLH ELISA Kit   小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白豚鼠黑色素瘤相關抗原(MAGE)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
PLA-802細胞寨卡病Elisa試劑盒血管位蛋白樣2/血管**素樣蛋白-2（多肽）Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1  酮脫氫酶激酶1抗體

泛素特異性肽酶13Elisa試劑盒胰高血糖素樣肽-2（多肽抗原）MITF  MITF相關轉(zhuǎn)錄因子抗體

含IQ元GTP酶激活蛋白3Elisa試劑盒94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白（抗原）MIS12  染色體及有絲分裂蛋白MIS12抗體

維生素B3Elisa試劑盒膜粘連蛋白 A抗原MIRK/Dyrk1B  雙特異性酪氨化調(diào)節(jié)激酶1B

維生素B7Elisa試劑盒G蛋白（鳥苷結(jié)合蛋白）（抗原）MIP4/CCL18  巨噬炎癥蛋白18抗體

鈣粘蛋白Elisa試劑盒糖皮質(zhì)受體 多肽MIP2/GRO Beta/CXCL2  巨噬炎癥蛋白2（ GRＯβ）抗體

凝血因子VaElisa試劑盒膜粘連蛋白-2抗原MIP-1 Beta/CCL4  巨噬炎癥因子1β 抗體 MIP-1β

凝血因子ⅧaElisa試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原)MIP-1 Alpha  巨噬炎癥因子1α抗體 MIP-1α

順烏頭酶Elisa試劑盒三鳥苷環(huán)水解酶（抗原）Mimitin  MYC誘導線粒體蛋白抗體