實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：組織細(xì)胞**瘤細(xì)胞;U-937
形態(tài)特性：?jiǎn)魏思?xì)胞

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

特征特性：該細(xì)胞是由NilssonK實(shí)驗(yàn)室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細(xì)胞性瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來的研究顯示該細(xì)胞在人混合細(xì)胞培養(yǎng)物上清、佛波酯、VitD3、γ-IFN、TNF和維A酸的誘導(dǎo)下可以向終末單核細(xì)胞分化。該細(xì)胞不合成球蛋白，EBV陰性；可產(chǎn)生溶菌酶、β-2-微球蛋白，受PMA刺激后可產(chǎn)生TNF-α；表達(dá)C3R；可作轉(zhuǎn)染宿主；表達(dá)Fas，對(duì)TNF和抗Fas的抗體敏感。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：維持細(xì)胞濃度在1×105~2×106/ml；根據(jù)細(xì)胞濃度3~4換液1次。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
對(duì)二標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.102mg/ml，體：異辛烷D1R(Mouse Dopamine D1 receptor) ELISA Kit  小鼠多巴D1受體豚鼠核糖核酶III(RNASEN)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,5-二硝標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mg/ml,溶劑：ADRA1A(Mouse adrenergic alpha-1A receptor) ELISA Kit  小鼠腎上腺素能a1A受體豚鼠多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.099mg/ml，體：異辛烷CR(Mouse Calretinin) ELISA Kit  小鼠鈣結(jié)合蛋白豚鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

間二標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.114mg/ml，體:異辛烷HABP(Mouse Hya]uronate binding protein) ELISA Kit  小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白豚鼠抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.3%CyPA(Mouse cyclophilin A) ELISA Kit  小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A豚鼠絨毛膜促性腺(CG)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 101μg/mLBMP-6(Mouse Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit  小鼠骨形成蛋白6豚鼠角質(zhì)轉(zhuǎn)谷氨酰酶(TGM1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mL，體：Mouse lymphocyte factor ELISA Kit  小鼠因子豚鼠胰蛋白酶原II(Try2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mlADH/VP/AVP(Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin) ELISA Kit  小鼠抗/血管加壓素/精氨加壓素豚鼠鈣調(diào)酶結(jié)合蛋白1(CABIN1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mlAcSDKP(Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit  小鼠N-乙酰-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨豚鼠解整合素金屬蛋白酶9(ADAM9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1，1-二乙烯標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.800mg/ml，體：PA-IgG/M/A(Mouse plaet antibodies IgG/M/A) ELISA Kit  小鼠抗血小板抗體IgG/M/A豚鼠失調(diào)癥蛋白質(zhì)2(ATXN2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,5-二硝標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mg/ml，溶劑：FN(Mouse Fibronectin) ELISA Kit  小鼠纖連蛋白豚鼠AMP活化蛋白激酶α1(PRKAα1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 99.8μg/mL（劇品）Flt3(Mouse FMS-like tyrosine kinase 3) ELISA Kit  小鼠FMS樣酪氨激酶3豚鼠粘蛋白13(MUC13)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.03mg/ml，體：IGFBP-1(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1) ELISA Kit  小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1豚鼠諾龍/去睪酮(NP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,2-二乙烷標(biāo)準(zhǔn)熔液 1.20mg/ml，體：IGFBP-2(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2) ELISA Kit  小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2豚鼠腦多巴神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CDNF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鏑標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlIL-16(Mouse Interleukin 16) ELISA Kit  小鼠白介素16豚鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  
U-937細(xì)胞氫ATP酶Elisa試劑盒血管緊張素Ⅱ-1型受體抗原MEF2D  肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體

L-氨解氨酶Elisa試劑盒NFkB誘導(dǎo)的激酶（抗原）MEF2C  肌增強(qiáng)因子2C抗體

NADPH氧化酶Elisa試劑盒活化復(fù)制因子1MEF2B  肌增強(qiáng)因子2B抗體

NADP蘋果酶Elisa試劑盒神經(jīng)肽SMEF2A  肌增強(qiáng)因子2抗體

Rubisco活化酶Elisa試劑盒神經(jīng)激肽B（抗原）MeCP2  化CpG結(jié)合蛋白2抗體

UDP-葡萄糖焦化酶Elisa試劑盒活化復(fù)制因子2（多肽）Measles virus fusion protein  麻疹病融合蛋白抗體

α酮戊二脫氫酶Elisa試劑盒化活化復(fù)制因子2抗原ME1  胞漿蘋果酶1抗體

β-1,3-葡聚糖酶Elisa試劑盒神經(jīng)激肽-B受體（抗原）MDR1/p-GP/CD243 (N-terminus)  多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體

β-葡萄糖苷酶Elisa試劑盒活化轉(zhuǎn)錄因子3抗原MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus)  多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端)
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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