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產(chǎn)品名稱：卵巢癌細胞；SKOV3
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到此細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性包括白喉、順鉑和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：消化CQ-5分鐘，1:2,3天內(nèi)可長滿
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

乙二四乙二鈉標準溶液0.05 M,溶劑:水SCF/MGF(Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor) ELISA kit  小鼠干因子/肥大生長因子豚鼠8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

吸收峰波長(nm)：400.0～620.0，體：酶標分析儀SDF-1 Beta/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1 Beta) ELISA kit  小鼠質(zhì)衍生因子1β豚鼠性T相關(guān)抗原4(CTLA4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

吸光度：0.200～1.000A， 體: 酶標分析儀 TGF- Beta1(Mouse Transforming Growth factor Beta1) ELISA kit  小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1豚鼠三肽肽酶I(TPP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

乙標準溶液 0.80mg/mL，體：水TNFsR- I (Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor I ) ELISA KIT  小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ豚鼠TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子1(TAF1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銪標準溶液 1000μg/mL in 10%HCLTNFsR- II (Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor II ) ELISA KIT  小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ豚鼠纖溶酶-抗纖溶酶復合物(PAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

乙二四乙(EDTA)二鈉純度標準物質(zhì) 99.96%TNF- Alpha(Mouse Tumor necrosis factor Alpha) ELISA KIT  小鼠腫瘤壞死因子α豚鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

乙汞標準溶液 75.3×10-6TNF- Beta(Mouse Tumor necrosis factor Beta) ELISA KIT  小鼠腫瘤壞死因子β豚鼠血管**素樣蛋白2(ANGPTL2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

環(huán)氧烷標準溶液 997.8mg/L,溶劑:二Col IV (Mouse Collagen Type IV ) ELISA KIT  小鼠Ⅳ型膠原豚鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

檸檬黃標準溶液0.50mg/mL，溶劑：水HK(Mouse Hexokinase) ELISA KIT  小鼠己糖激酶豚鼠中性粒堿性酶(NAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

熒蒽標準溶液 10～100μg/mL，體：PDH E1(Mouse pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA KIT  小鼠酮脫氫酶E1豚鼠可溶性間粘附分子1(sICAM-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

吡氟禾草靈標準溶液 0.101mg/mlPGE2 ELISA Kit(mouse)  小鼠前列腺素E2豚鼠顆粒體蛋白(GRN)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氟硅唑標準溶液 1.00mg/mlGSK(Mouse glycogen synthase kinase) ELISA KIT  小鼠糖原合成酶激酶豚鼠葡萄糖6異構(gòu)酶(GPI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

仲丁威標準溶液 1.00mg/mlCXCL16(Mouse CXC-chemokine ligand 16) ELISA KIT  小鼠CXC趨化因子配體16豚鼠乙脫氫酶1(ADH1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氟標準溶液 1.00μg/g，體:0.01mol/LH3BO3u-T3(Mouse Ultrasensitivity Tri-iodothyronine) ELISA KIT  小鼠高敏狀腺原氨豚鼠鳥苷激酶1(GUK1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液 10.8mg/ml，體：純水Bcl-2(Mouse B-cell leukemia/lymphoma 2) ELISA KIT  小鼠B瘤因子2豚鼠瘦素受體(LEPR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
SKOV3細胞泛素Elisa試劑盒一氧化氮合成酶-3（抗原）MCM5  微小染色體維持缺陷蛋白5抗體

鈣調(diào)酶Elisa試劑盒神經(jīng)肽 Y（抗原）MCM3  微小染色體維持缺陷蛋白3抗體

鈣調(diào)素Elisa試劑盒谷氨受體（抗原）MCM2  微小染色體維持缺陷蛋白2抗體

谷氨合成酶Elisa試劑盒神經(jīng)生長因子-3（抗原）Mcl1/BCL2L3  髓樣分化蛋白2抗體

谷氨脫氫酶Elisa試劑盒神經(jīng)生長因子4/5（抗原）MCKD2/UMOD  尿調(diào)節(jié)蛋白抗體

谷氨酰合成酶Elisa試劑盒神經(jīng)生長因子（抗原）MCKD2/UMOD  尿調(diào)節(jié)蛋白抗體

谷胱甘肽還原酶Elisa試劑盒Bcl-xL蛋白抗原MCK10/CD167a/DDR1  神經(jīng)上皮酪氨激酶抗體（癌激酶10）

果膠果酯酶Elisa試劑盒化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原MCHR/GPR24  G蛋白偶聯(lián)受體24抗體

果膠酶Elisa試劑盒丁酰膽堿脂酶抗原(N端)MCG10  RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體

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