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產品名稱：卵巢癌細胞；3AO
形態(tài)特性：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

異辛烷/中15種有機農藥混合溶液 溶劑:異辛烷/(質量比:CGRP(Mouse calcitonin gene related peptide) ELISA Kit  小鼠降鈣素因相關肽豚鼠腎上腺皮質發(fā)育異常蛋白(ACD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

酚標準溶液 1.0mg/ml，體：MTL(Mouse Motilin) ELISA Kit  小鼠胃動素豚鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液 1.00mg/mlSS(Mouse Somatostatin) ELISA Kit  小鼠生長抑素豚鼠中期因子(MK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液 1000μg/mL，體:1%HClFbg(Mouse Fibrinogen) ELISA Kit  小鼠血纖蛋白原豚鼠抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液 100μg/mL，體:1%HCl PAF(Mouse plaet activating factor) ELISA Kit  小鼠血小板活化因子豚鼠血管內皮鈣黏蛋白(VE-Cadherin)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氫PH標準物質 PH值(25°C)：6.864sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit  小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α豚鼠水通道蛋白4(AQP-4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

菲標準溶液 395μg/mL，體:MYS(Mouse Myosin) ELISA Kit  小鼠肌球蛋白豚鼠四旋蛋白30 (TSPAN30)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

撲草凈 分析標準品，99.5%MHC I /H-2 I (Mouse major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類豚鼠轉運蛋白2(TNPO2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

對硫標準溶液 1.00mg/mL，體：GATA4Mouse GATA binding protein 4) ELISA Kit  小鼠GATA結合蛋白4豚鼠二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

草標準溶液 1.00mg/mlIP-10/CXCL10(Mouse interferon-inducible protein 10) ELISA Kit  小鼠干擾素誘導蛋白10豚鼠核糖核酶抑制因子(RI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

草甘膦 分析標準品，99.9%ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  小鼠上皮中性?；罨?8豚鼠肌-3-激酶(PI3K)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

咪鮮安 分析標準品，98.4%OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody) ELISA KIT  小鼠氧化低密度脂蛋白抗體豚鼠酮激酶M2型同工酶(PKM2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

五酚標準溶液 1.03mg/ml，體：ASMA(Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit  小鼠抗平滑肌抗體豚鼠腦型肌激酶(CKB)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

化 分析標準品，99.98%M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit  小鼠胚胎干系MESPU30豚鼠速激肽受體2(TACR2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

化 分析標準品，K（99.97%）/Cl（100.00%）NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit  小鼠核因子κB亞p65親和肽豚鼠G蛋白β1(GNβ1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
3AO細胞鹽轉運三腺苷酶抗體Elisa試劑盒素（抗原）MAP7D1/RPRC1  精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗體

滲調蛋白Elisa試劑盒素受體（抗原）MAP65/ASE 1  擬南芥MAP65蛋白抗體

水楊Elisa試劑盒激酶信號-1抑制劑（抗原）MAP4K6/MINK1  絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體

水楊酯Elisa試劑盒心肌肌凝蛋白多肽MAP4K4  絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體

絲氨羥轉移酶Elisa試劑盒核突觸蛋白（抗原）MAP4K1  造血祖激酶1抗體

絲裂原激活的蛋白激酶;MAP激酶Elisa試劑盒核突觸蛋白（抗原）MAP4  微管相關蛋白4抗體

甜菜堿Elisa試劑盒癌相關抗原抗原MAP3K9  絲裂原活化蛋白激酶3K9抗體

甜菜堿脫氫酶Elisa試劑盒P物質受體（抗原）MAP3K8/TPL2  絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體

褪黑素Elisa試劑盒化鈣介質素抗原MAP3K7IP3  NFKB激活蛋白1抗體

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