實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：
培養(yǎng)條件：內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基，scienCA-ll，貨號：1001

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
滅多威 分析標準品，99.9%HD(Mouse Histone Deacetylase)ELISA Kit  小鼠組織蛋白去乙?；鸽嗍笾窪2(PLD2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1,1,2-三乙烷標準溶液 1.09mg/ml，體：E3(Mouse Estriol)ELISA Kit  小鼠雌三豚鼠多聚球蛋白受體(PIGR/SC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液 1000μg/ml，溶劑：ASD(Mouse Androstenedione)ELISA Kit  小鼠雄烯二酮豚鼠V-Myc骨髓瘤病癌因同源物(MYC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標準溶液0.99mg/ml,溶劑:F-TESTO(Mouse Free Testoterone)ELISA Kit  小鼠游離睪酮豚鼠外生骨疣蛋白1(EXT1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2,4,6-三硝標準溶液0.99mg/ml,溶劑:T(Mouse Testoterone)ELISA Kit  小鼠睪酮豚鼠褪黑素(MT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

錫標準溶液 100μg/mL，體: 10%HClPROG(Mouse Progesterone)ELISA Kit  小鼠孕/孕酮豚鼠肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK/MYLK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

碲標準溶液 100μg/ml，體:HCIsRANKL(Mouse soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand)ELISA Kit  小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配豚鼠原纖維蛋白3(FBN3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1000μg/mL，體:10%HClCT(Mouse Calcitonin)ELISA Kit  小鼠降鈣素豚鼠胞漿型脂酶A2(cPLA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銩標準溶液 1000μg/mL，體：10%HCLET-1(Mouse Endothelin 1)ELISA Kit  小鼠內(nèi)皮素1豚鼠前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(PTGS1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1,2,5-三標準溶液0.099mg/ml,溶劑:異辛烷E2(Mouse Estradiol)ELISA Kit  小鼠雌二豚鼠15脂加氧酶(15-LO)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

總堿度溶液標準物質(zhì) 1000μg/mL，體:水Cortisol(Mouse Cortisol)ELISA Kit  小鼠皮質(zhì)豚鼠松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

三：5.00mg/L，四化碳：0.20mg/L，體：TSH(Mouse Thyroid Stimulating Hormone)ELISA Kit  小鼠促狀腺素豚鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白(MAPτ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氬-氬法地質(zhì)年齡標準物質(zhì)(角閃石) 體:角閃石Methylase(Mouse Methylase)ELISA Kit  小鼠化酶豚鼠髓樣前體抑制因子2(MPIF2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

尿素氮溶液標準物質(zhì) 尿素氮:1000.4 mg/LPCNA(Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody)ELISA Kit  小鼠抗增殖核抗原抗體豚鼠煙酰腺嘌呤二核苷(NADPH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蚜滅標準溶液 0.100mg/mlLPL(Mouse lipoprotein lipase)ELISA Kit  小鼠脂蛋白脂酶豚鼠肝臟/紅酮激酶(PK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HLEC細胞軟脂Elisa試劑盒CC趨化因子受體3抗原Ly-6G/Gr-1  抗原6G抗體

油Elisa試劑盒表面趨化因子受體2A抗原LXR alpha  肝臟X受體抗體

超氧陰離子自由Elisa試劑盒表面趨化因子受體4抗原Lxn/Latexin  羧肽酶抑制劑抗體

氧化酶Elisa試劑盒表面趨化因子受體6抗原Lumican  膜聚糖蛋白抗體

硫鹽Elisa試劑盒表面趨化因子受體6抗原Luciferase  熒光素酶抗體

半胱氨蛋白酶Elisa試劑盒CC趨化因子受體7（多肽）Lubricin/SZP  淺表層粘膜蛋白多糖抗體

抗素Elisa試劑盒CXCL10趨化因子10/干擾素誘導(dǎo)蛋白10抗原LTBP4  轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白4抗體

白介素1αElisa試劑盒血管內(nèi)皮生長因子（多肽抗原）LTB4-R2  白三烯B4受體2抗體

谷胱甘肽疏轉(zhuǎn)移酶Elisa試劑盒CD10抗原LTB4-R1/BLTR  白三烯B4受體1抗體
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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