實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：膠質(zhì)瘤細(xì)胞；SHG-44
形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：SHG-44細(xì)胞株源自一例2-3級(jí)前沿結(jié)星細(xì)胞瘤。染色體組型顯示89.2%的超三倍體。在Wistar大鼠和裸鼠中接種都能成功。細(xì)胞含有神經(jīng)系統(tǒng)特有的S-100蛋白和星細(xì)胞特有的GFA蛋白

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
鄰乙 98%Plant hormone abscisic acid,ABA ELISA Kit  植物脫落豚鼠趨化因子樣因子(CKLF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

α,α,α-三 99%Plant Vitamin K1,VK1 ELISA Kit   植物維生素K1豚鼠生長(zhǎng)分化因子5(GDF5)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

肉桂 97%Plant Vitamin B12,VB12 ELISA Kit   植物維生素B12豚鼠轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

丁位癸內(nèi)酯 98%Plant Vitamin A,VA ELISA Kit   植物維生素A豚鼠I型前膠原羧端原肽(PICP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

位癸內(nèi)酯 98%Plant Vitamin E,VE EELISA Kit   植物維生素E豚鼠半凝集素1(GAL1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

丁位十二內(nèi)酯 98%Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit   植物維生素D2豚鼠質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-羥丁乙酯  98%Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit   植物維生素D3豚鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體3型(NTRK3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-羥丁乙酯  97%,FGPlant Vitamin D,VD ELISA Kit   植物維生素D豚鼠周期素D3(CCND3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-乙酯 98%Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit   植物維生素B6豚鼠I型膠原交聯(lián)氨端肽(NTXI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

3-羥己乙酯  Kosher, ≥98%Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit   植物25羥維生素D3豚鼠擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變因子(ATM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

反-2-己烯乙酯 99%Plant Human Vitamin C,VC ELISA Kit   植物維生素C豚鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子受體樣蛋白(PDGFRL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

惕各乙酯  98%Alpha-bungarotoxin, Alpha-BGT ELISA Kit  α-銀環(huán)蛇素豚鼠糖盞蛋白(GC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

惕各乙酯  98%，香料級(jí)Bacillus thuringiensis,BT ELISA Kit  蘇云金芽孢桿蛋白豚鼠GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

乙葉酯 98%Guinea pig ovalbumin specific IgG,OVA sIgG ELISA Kit  豚鼠卵清蛋白特異性IgG豚鼠纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

反式-2-己烯 97%Guinea pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit   豚鼠白介素4豚鼠纖溶抑制因子(TAFI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
SHG-44細(xì)胞總木脂素Elisa試劑盒趨化因子(C-X3-C 元)配體1抗原LEPREL2  皮屑樣蛋白2抗體

鳥氨轉(zhuǎn)氨酶Elisa試劑盒CX3C趨化因子受體1抗原LEO1  RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體

脯氨脫氫酶Elisa試劑盒周期素A抗原L-enk  亮氨腦肽抗體

△1-吡咯啉-5-羧合成酶Elisa試劑盒周期素B1抗原Legumain  半胱氨蛋白酶抗體

α-酚轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa試劑盒周期素D2抗原Lefty/TGF beta 4  轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β4抗體TGF β4

羥吡啶Elisa試劑盒周期素D3抗原LEF-1  增強(qiáng)因子-1抗體

氨糖苷類-3-轉(zhuǎn)移酶2Elisa試劑盒色素P450 3A4抗原LECT1  白衍生化學(xué)吸引素抗體

脫氫抗壞血Elisa試劑盒富半胱氨肝素結(jié)合蛋白61抗原LDOC1/BCUR1  癌癥亮氨拉鏈下調(diào)因子1抗體

還原型抗壞血Elisa試劑盒人巨病UL23抗原LDL receptor  低密度脂蛋白受體抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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