冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：SK-N-SH細(xì)胞系由J.L.Bieder建系，它與SK-N-MC所不同的是倍增時(shí)間較長(zhǎng)且多巴胺-β-羥基酶水平較高。SK-N-SH在細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)中用作靶細(xì)胞系。

培養(yǎng)條件：MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)，添加NaHCO31.5g/L，SodiumPyruvate0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

傳代方法：1:2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-5-HT/RBITC  紅色羅丹明標(biāo)記5-羥色抗體IgG豚鼠α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：微量鹽Anti-5-HTR1A/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體1A抗體IgG豚鼠組織因子途徑抑制因子2(TFPI2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mL，體：1%HNO3Anti-5-HTR1B /FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體1B抗體IgG豚鼠剪切修復(fù)交叉互補(bǔ)因1(ERCC1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.500μg/g，體：0.2%(v/v)H2SO4，K+2.2mg/L，Na+2Anti-5-HTR2A/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體2A抗體IgG豚鼠巨噬集落激因子(MCSF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈀標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:2.0 mol/L HClAnti-5-HTR2B/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體2B(5-HT/serotonin R2B)抗體IgG豚鼠β2糖蛋白(β2-GP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈀標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mlAnti-5-HTR3/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體3抗體IgG豚鼠白介素11(IL-11)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-5-HTR4/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體4抗體IgG豚鼠B連接蛋白(BLNK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

銨標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-5-LOX/FITC  熒光素標(biāo)記5-脂氧合酶抗體IgG豚鼠甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨蛋白酶2(MASP2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

溴標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) /FITC  熒光素標(biāo)記化5-脂氧合酶抗體IgG豚鼠尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) /FITC  熒光素標(biāo)記化5-脂氧合酶抗體IgG豚鼠不對(duì)稱二精氨(ADMA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：1.5 mol/L HNO3Anti-5-HTT/SERT/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體IgG豚鼠血紅蛋白β(HBβ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋇標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑:1.0 mol/L HNO3Anti-8-OHdG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗8-羥脫氧鳥(niǎo)苷蛋白抗體IgG豚鼠P選擇素(SELP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋇溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 鋇溶液質(zhì)量濃度(20℃):19.532mg/ml,體Anti-AACT-Alpha1 /RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記α-1抗胰糜蛋白酶IgG豚鼠質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋇標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，體: 5%HClAnti-AACT-Alpha1/FITC  熒光素標(biāo)記α-1抗胰糜蛋白酶豚鼠S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AAK1/FITC  熒光素標(biāo)記AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體IgG豚鼠血管性血友病因子(VWF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
SK-N-SH細(xì)胞結(jié)合態(tài)淀粉合成酶Elisa試劑盒多能發(fā)育相關(guān)因2抗原LBP1/Upstream Binding Protein 1  上游結(jié)合蛋白1抗體

淀粉合成酶Elisa試劑盒死亡受體4抗原Layilin  透明質(zhì)受體抗體

景天庚酮糖二酶Elisa試劑盒腫瘤調(diào)亡素/死亡受體5抗原Layilin  透明質(zhì)受體抗體

草Elisa試劑盒橋粒斑蛋白1抗原LATS2  腫瘤抑制因LATS2抗體

NADPH氧化酶Elisa試劑盒蓬亂蛋白1LATS1  腫瘤抑制因LATS1抗體

檸檬合酶Elisa試劑盒鳥(niǎo)苷三酶－發(fā)動(dòng)蛋白2抗體LAT/LAT1  T活化連接蛋白抗體

酪氨解氨酶Elisa試劑盒發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白多肽抗原LASS6  長(zhǎng)壽相關(guān)因lASS6抗體

肉桂脫氫酶Elisa試劑盒轉(zhuǎn)錄因子E2F-1LASS5  長(zhǎng)壽相關(guān)因lASS5抗體

果糖-1,6-二酶Elisa試劑盒轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗原LASS4  長(zhǎng)壽相關(guān)因lASS4抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。