實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：SK-N-BE(2)；神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：1972年11月從一們多次化療及放療的擴(kuò)散性神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株。該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。有報(bào)道稱SK-N-BE(2)細(xì)胞的飽和濃度超過(guò)1x106細(xì)胞/平方厘米。細(xì)胞形態(tài)多樣，有的有長(zhǎng)突觸，有的呈上皮細(xì)胞樣。細(xì)胞會(huì)聚集，形成團(tuán)塊并浮起

培養(yǎng)條件：MEM培養(yǎng)基(GIBCO,添加NaHCO31.5g/L，SodiumPyruvate0.11g/L)，45%；F-12培養(yǎng)基(GIBCO,添加L-glutamine300mg/L,NaHCO31.5g/L)，45%；胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度

傳代方法：1:2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/mlAnti-AARS2/FITC  熒光素標(biāo)記氨酰tRNA合成酶2抗體IgG豚鼠前膠原C端蛋白酶增強(qiáng)子1(PCPE1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

生化需氧量(BOD)標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AARS2 /FITC  熒光素標(biāo)記氨酰tRNA合成酶2抗體IgG豚鼠Salusin α蛋白(Salusin α)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AAT/FITC  熒光素標(biāo)記α-1抗胰蛋白酶抗體IgG豚鼠載脂蛋白E(ApoE)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/l,溶劑：1%硫Anti-AATF/FITC  熒光素標(biāo)記拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG豚鼠信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/l,溶劑：1%硫Anti-AATK/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡關(guān)聯(lián)酪氨激酶抗體IgG豚鼠化酶(Methylase)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100ug/mL(20degree)，體:1%HNO3Anti-BTK/ATK /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗體IgG豚鼠CD3d分子(CD3d)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mlAnti-Phospho-Btk(Tyr223) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗體IgG豚鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/mlAnti-Phospho-Btk(Ser180) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗體IgG豚鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-ABCA1/FITC  熒光素標(biāo)記腺苷三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體IgG豚鼠趨化因子CX3C受體1(CX3XR1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L，溶劑：1%鹽Anti-Tap1/ABCB2 /FITC   熒光素標(biāo)記ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)因子1抗體IgG豚鼠CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000ug/mL，體:5%HCIAnti-ABCB5/FITC  熒光素標(biāo)記ATP結(jié)合蛋白家族5抗體IgG豚鼠S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,體: 5%鹽Anti-ABCB6/FITC  熒光素標(biāo)記ABCB6抗體IgG豚鼠纖蛋白原(FG)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：1%硝Anti-TCTP/FITC  熒光素標(biāo)記翻譯控制腫瘤蛋白抗體IgG豚鼠粘蛋白7(MUC7)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：1%硝Anti-Phospho-TCTP (Ser46) /FITC  熒光素標(biāo)記化翻譯控制腫瘤蛋白抗體IgG豚鼠鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II α(CAMK2α)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液100ug/mL，體: 1%硝Anti-ABCF1/FITC  熒光素標(biāo)記ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體IgG豚鼠優(yōu)球蛋白(EL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  
SK-N-BE(2)細(xì)胞亞硝還原酶Elisa試劑盒轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原LASS3  長(zhǎng)壽相關(guān)因lASS3抗體

甘氨脫羧酶Elisa試劑盒轉(zhuǎn)錄因子E2F-6抗原LASS2  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因1抗體

絲氨乙轉(zhuǎn)氨酶Elisa試劑盒E2 tag多肽抗原LASS1  長(zhǎng)壽相關(guān)因lASS1抗體

甘氨甜菜堿Elisa試劑盒膠質(zhì)谷氨運(yùn)載蛋白3抗原LAS2/C18orf54  肺腺瘤易感蛋白2抗體

嘔吐素Elisa試劑盒EB病編碼核蛋白-3large S protein  人乙肝病pre S1/S2蛋白抗體

乙酰合成酶Elisa試劑盒內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗原LARG  Rho的鳥嘌呤核苷交換因子12抗體

還原態(tài)煙酰腺嘌呤二核苷Elisa試劑盒內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗原LAPTM4B  溶酶體蛋白跨膜β4抗體

氧化態(tài)煙酰腺嘌呤二核苷Elisa試劑盒嗜性粒陽(yáng)離子蛋白抗原LAPTM4A  溶酶體相關(guān)膜蛋白4α抗體

GDP-L-半糖酶Elisa試劑盒外胚層發(fā)育**抗原LAP3  亮氨氨肽酶3抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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