冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；mMMSCS-11

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

硝根離子(NO4-)標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L，溶劑：水Anti-Agtr1/AT1a/FITC  熒光素標(biāo)記血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體抗體IgG豚鼠蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M2(M-AChRM2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硝根離子(NO5-)標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:水Anti-AGER/Gold  金離子標(biāo)記的晚期糖化終末產(chǎn)物特異性受體抗體豚鼠維生素D受體(VDR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硝根離子(NO6-)標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,溶劑:水Anti-Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC  熒光素標(biāo)記芳香烴受體抗體IgG豚鼠白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

釹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC  熒光素標(biāo)記芳香烴受體抗體IgG豚鼠脫氫表雄酮硫酯(DHEA-S)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

釹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mL，體：10%HClAnti-AIF/FITC  熒光素標(biāo)記Anti-AIF抗體IgG豚鼠受體TNFRSF結(jié)合絲氨蘇氨激酶2(RIPK2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

總氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AIF/FITC  熒光素標(biāo)記調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體IgG豚鼠過氧化物酶體生物合成因子2 (PEX2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硝鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-A/H1N1-M2 Human/Gold  膠體金標(biāo)記兔抗人A型流感病H1N1-M2抗體IgG豚鼠叉頭框蛋白C1(FOXC1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

亞硝鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-A/H1N1-M2 Human/Gold  膠體金標(biāo)記兔抗人A型流感病H1N1-M2抗體IgG豚鼠轉(zhuǎn)膠蛋白(TAGLN)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

亞硝鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L(以N計)，體：水Anti-AIMP2/JTV1/FITC  熒光素標(biāo)記抗AIMP2抗體IgG豚鼠鐵調(diào)素(Hepc)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AK-1/FITC  熒光素標(biāo)記腺苷激酶-1抗體IgG豚鼠載脂蛋白F(ApoF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

一氧化二氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-ADK/adenylate kinase/FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠腺苷激酶抗體IgG豚鼠普列克底物蛋白同源物樣結(jié)構(gòu)域家族A成員2(PHLDA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鋨標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AKAP95/AKAP8 /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶A錨定蛋白95抗體IgG豚鼠促狀腺胚胎因子(TEF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

總有機(jī)碳（TOC）標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L，體：水Anti-AKT2/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶B2抗體IgG豚鼠G蛋白偶聯(lián)受體120(GPR120)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-phospho-Akt/FITC  熒光素標(biāo)記抗化蛋白激酶B抗體IgG豚鼠生長因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L，溶劑：水Anti-CEA/Gold  膠體金標(biāo)記癌胚抗原抗體IgG豚鼠孤腓肽(OFQ/N)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
mMMSCS-11細(xì)胞總糖Elisa試劑盒纖維母生長因子5抗原Kv4.3/KCND3  離子通道蛋白Kv4.3抗體

還原糖Elisa試劑盒衰老關(guān)鍵蛋白抗原Kv1.3/PCN3  離子通道蛋白Kv1.3抗體

激動素Elisa試劑盒FosB抗原Ku-80  DNA修復(fù)酶Ku-80抗體

二酰輔酶AElisa試劑盒FOS樣抗原2Ku-70  DNA修復(fù)酶Ku70抗體

4-香豆輔酶AElisa試劑盒叉頭蛋白F1抗原KT3 tag  KT3 tag抗體

精氨激酶Elisa試劑盒插頭蛋白J1抗原KSR1  Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體

赤霉素4Elisa試劑盒FoxP1（T轉(zhuǎn)錄因子）抗原KRIT1  腦海綿狀血管畸形蛋白1抗體

赤霉素7Elisa試劑盒插頭蛋白M1抗原KRG2/DDX11  角質(zhì)生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體

二氫玉米素核苷Elisa試劑盒麻疹病抗原（麻疹病融合蛋白）KRCC1  含賴氨卷曲螺旋蛋白1抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

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