冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：膀胱癌阿霉素耐藥株
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：RPMI-1640

傳代方法：1：2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：1%鹽Anti-ASPP1/FITC  熒光素標(biāo)記p53凋亡激蛋白1抗體IgG豚鼠激肽釋放酶6(KLK6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銻標(biāo)準(zhǔn)溶液1.24±0.26mg/LAnti-ASPP2/FITC  熒光素標(biāo)記P53凋亡激蛋白2抗體IgG豚鼠角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：微量鹽Anti-AT/AGT /FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素原抗體IgG豚鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

中標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-AT1/FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素I抗體IgG豚鼠胰島素原(PI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

水質(zhì)標(biāo)樣 濃度范圍:0.9,2.01(mg/L)，分析標(biāo)準(zhǔn)品 Anti-AT1R/FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgG豚鼠突觸素(SYP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

烯標(biāo)準(zhǔn)溶液7.0mg/L,溶劑:二硫化碳Anti-AT2R/FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-2型受體抗體IgG豚鼠激活素A(ACVA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

烯-2，4-二腙 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-ATF1/FITC  熒光素標(biāo)記活化復(fù)制因子1抗體IgG豚鼠靶向核糖核酶(TR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

中阿特拉津標(biāo)樣 濃度范圍:100(mg/L)，分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-ATR/ACTR(phospho Ser428) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化ATR抗體IgG豚鼠神經(jīng)降壓素(NT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氨標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L,溶劑:水Anti-ATF2/FITC  熒光素標(biāo)記活化復(fù)制因子2抗體IgG豚鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF) 酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、猴化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)抗體IgG豚鼠凝血因子Ⅻ(F12)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：水Anti-ATF3/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgG豚鼠蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：Anti-ATF4/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體IgG豚鼠抗環(huán)胍氨肽抗體(ACCPA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.989mg/ml，體：Anti-ATF6/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體IgG豚鼠β-黑色素(βMSH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml，溶劑：Anti-ATG1/ULK1/FITC  熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白1抗體IgG豚鼠胸腺肽α1(Ta1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%Anti-ATG7/FITC  熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白7抗體IgG豚鼠早老素1(PS1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 
BIU-87/Adr細(xì)胞核孤兒受體4A1Elisa試劑盒流感病A抗原KLHL13  kelch樣蛋白13抗體

9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶Elisa試劑盒透明質(zhì)酶/玻璃酶抗原KLHL11  Kelch樣蛋白11抗體

9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶Elisa試劑盒HA tag標(biāo)簽多肽KLHL10  Kelch樣蛋白10抗體

內(nèi)源Elisa試劑盒HA tag標(biāo)簽（分支多肽）KLHDC9  KLHDC9蛋白抗體

β-胡蘿卜素羥化酶Elisa試劑盒肝生長因子激活物抑制因子抗原KLHDC8A  KLHDC8A蛋白抗體

擴展蛋白酶Elisa試劑盒人類血紅蛋白α1抗原KLHDC5  kelch樣蛋白5抗體

黃色素Elisa試劑盒乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原KLH  血藍(lán)蛋白抗體

α-烯化酶Elisa試劑盒乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原KLH  血藍(lán)蛋白抗體

烯酶Elisa試劑盒肝炎病X蛋白(HBxAg)C端抗原KLF9/BTEB1  轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

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