冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：黑色素瘤細(xì)胞；A375.S2
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM/F12+10%FBS(GIBCO)

傳代方法：1：2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

中代類混合標(biāo)樣代類:、1, 2－二、1, 4－二Anti-Bcl-10/CLAP/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠Bcl-10抗體IgG雞G蛋白偶聯(lián)雌受體1(GPER1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

一二溴標(biāo)準(zhǔn)溶液分析標(biāo)準(zhǔn)品,溶劑:Anti-Bcl-10(phospho Ser218)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化Bcl-10抗體IgG雞血小板衍生生長因子D(FDGFD)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

代類：、1,2－二、1,3－二、1,4－二、1,2,4Anti-Bcr/CD3D/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠T受體抗體IgG雞脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二二酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：Anti-Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化T受體抗體IgG雞甘肽/甘素(GAL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二二酯標(biāo)準(zhǔn)溶液5000μg/ml，溶劑：Anti-BCRP/ABCG2/BXP-21 /FITC  熒光素標(biāo)記三腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體IgG雞N-乙酰半糖-6-硫酯酶(GAS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二二丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液200μg/ml，溶劑：Anti-Bdkrb2/B2R/FITC  熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG雞肌激酶同工酶MB(CKMB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,6-二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：Anti-BDNF/FITC  熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgG雞粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑：Anti-BECN1/FITC  熒光素標(biāo)記一種抑癌因抗體IgG雞抗糖脂抗體(AGA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)二標(biāo)準(zhǔn)溶液溶劑：Anti-EpCAM/CD326/FITC  熒光素標(biāo)記上皮特異性EpCAM/CD326蛋白抗體IgG雞信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子6B(STAT56B)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,4-二硝標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑：Anti-Beta-casein( Beta-casein)/FITC  熒光素標(biāo)記 β-酪蛋白(抗體)IgG雞觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：Anti-BFGF/FITC  熒光素標(biāo)記堿性成纖維生長因子抗體IgG雞骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白1(GREM1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

中1,2－二標(biāo)樣 濃度范圍:1034±18ug/ml，分析標(biāo)準(zhǔn)品 Anti-BGP/FITC  熒光素標(biāo)記骨保護(hù)蛋白/骨鈣素抗體IgG雞伴侶蛋白10(CPN10)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

間二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑：Anti-Bid/FITC  熒光素標(biāo)記BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體IgG雞抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

間二標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品，體：Anti-AQP-2/HRP (aquaporin Protein-2)  辣根過氧化物酶標(biāo)記水通道蛋白-2抗體IgG雞白活化黏附因子(ALCAM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鄰二二正辛酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，體：Anti-BIN1/FITC  熒光素標(biāo)記橋連整合因子蛋白抗體IgG雞質(zhì)裂解蛋白/質(zhì)溶素(MAT)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
A375.S2細(xì)胞琥珀脫氫酶Elisa試劑盒人類狀瘤病18E6KIF11/Eg5/TRIP5  驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1抗體（狀腺受體相互作用蛋白5）

α-淀粉酶Elisa試劑盒人類狀瘤病16抗原Kidins220  220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體

化組蛋白Elisa試劑盒結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗原KIAA1576/VAT1L  囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1家族蛋白抗體

豆Elisa試劑盒原癌因H-ras抗原KIAA1522  KIAA1522蛋白抗體

谷胱甘肽Elisa試劑盒熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗原Ki-67 (Proliferation Marker)  Ki67蛋白抗體

生長Elisa試劑盒HRAS樣抑制因子3抗原KGF/FGF7  纖維母生長因子7抗體

蔗糖合成酶Elisa試劑盒熱休克蛋白-47抗原KF1/ZFP103  鋅指蛋白103抗體

神經(jīng)酰-1-Elisa試劑盒熱休克蛋白90α抗體Ketohexokinase  肝果糖激酶抗體

鞘糖脂Elisa試劑盒熱休克蛋白HSP105抗原Keratocan  角膜蛋白多糖抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。