實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：皮膚鱗癌細(xì)胞；A-431
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：該細(xì)胞源自一位患有皮膚鱗狀細(xì)胞癌的85歲女性，是GiardDJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。該細(xì)胞在抑制小鼠體內(nèi)可成瘤，在瓊脂上培養(yǎng)可形成克??；是一個(gè)超三倍體人細(xì)胞株。

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
水質(zhì)總有機(jī)碳標(biāo)樣 濃度范圍:（24.4±1.5）mg/l分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CC16/FITC  熒光素標(biāo)記克拉拉蛋白(Clara蛋白)抗體IgG雞集蛋白亞家族成員11(COLEC11)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

中有機(jī)農(nóng)藥混合標(biāo)樣分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CCK8/FITC  熒光素標(biāo)記膽囊收縮素/縮膽囊素抗體(八肽)雞吡哆激酶(PDXK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

中有機(jī)農(nóng)藥混合標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CCL1/I-309/TCA3/FITC  熒光素標(biāo)記嗜粒趨化蛋白CCL1抗體IgG雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

五酚標(biāo)準(zhǔn)溶液776mg/L,溶劑:Anti-CCL3/MIP-1 Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白1α抗體IgG雞谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶ω1(GSTω1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液1.35-4.29mg/L,水質(zhì)分析用Anti-CCL4/MIP-1 Beta/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白1β抗體IgG雞生長分化因子11(GDF11)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L，溶劑：水Anti-CCL5/RANTES/FITC  熒光素標(biāo)記調(diào)節(jié)活化的正常T表達(dá)和的因子IgG雞白分化抗原30配體(CD30L)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

間三酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：Anti-CCL6/C10/FITC  熒光素標(biāo)記嗜粒趨化蛋白CCL6抗體IgG雞組織轉(zhuǎn)谷氨酰酶(TGM2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 500μg/ml，溶劑：Anti-CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎癥蛋白-1γ抗體IgG雞纖維蛋白(FBL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

中對(duì)硫標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CCL11/FITC  熒光素標(biāo)記嗜粒趨化蛋白抗體IgG雞糖鏈抗原153(CA153)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)硫標(biāo)準(zhǔn)溶液500μg/ml，溶劑：（劇品）Anti-CCL12/MCP-5/FITC  熒光素標(biāo)記單核趨化蛋白5抗體IgG雞G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白4(RGS4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

中對(duì)硫標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）Anti-CCL13/MCP-4/FITC  熒光素標(biāo)記單核趨化蛋白4抗體IgG雞補(bǔ)體片斷5b(C5b)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

多聯(lián)(Aroclor 1248)標(biāo)準(zhǔn)溶液98.6μg/mlAnti-CCL14/HCC-1/FITC  熒光素標(biāo)記嗜粒趨化蛋白14抗體IgG雞生長調(diào)節(jié)致癌因γ(GROγ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

多聯(lián)(Aroclor 1221)標(biāo)準(zhǔn)溶液Anti-CYLD/cylindromatosis 1/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠微管結(jié)合蛋白CYLD抗體IgG雞Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L，溶劑：水Anti-phospho-CYLD(Ser418) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化微管結(jié)合蛋白CYLD抗體IgG雞白介素6(IL-6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 500ml/L，溶劑：水Anti-CCL15/MIP5/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白15IgG雞卷曲同源物8(FZD8)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
A-431細(xì)胞糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa試劑盒c-Jun氨末端激酶1/3多肽抗原Jun B  活化蛋白激酶B抗體

單糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa試劑盒化氨末端激酶1/2/3（pJNK1/2/3）抗原JNK3/MAPK10  氨末端激酶3抗體

馬鈴薯病YElisa試劑盒Ki-67 AntigenJNK2  氨末端激酶2抗體

馬鈴薯病AElisa試劑盒腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原JNK1/3  氨末端激酶1/3抗體

馬鈴薯病SElisa試劑盒化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原JNK1/2/3  氨末端激酶1/2/3抗體

馬鈴薯病MElisa試劑盒化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原JMY  連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體

谷氨酰Elisa試劑盒脫氫酶抗原JMJD7  組蛋白去轉(zhuǎn)移酶JMJD7抗體

尿苷二葡萄糖焦化酶Elisa試劑盒瘦素受體JMJD6  凋亡受體抗體

赤霉素合成酶Elisa試劑盒脂蛋白脂酶A2抗原JMJD5  組蛋白去化酶JMJD5抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。