冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：皮膚成纖維細(xì)胞；HuSk-FBCs-11

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

鄰二標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml，溶劑：Anti-CD34/RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD34抗體IgG雞成纖維生長因子6(FGF6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鄰二標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mL，體：Anti-CD44/FITC  熒光素標(biāo)記CD44抗體IgG雞角蛋白19(CK-19/KRT19)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mg/l,分析標(biāo)準(zhǔn)品,水質(zhì)分析 Anti-CD43/SPN/FITC  熒光素標(biāo)記CD43抗體IgG雞神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG-3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L，溶劑：1%鹽Anti-CD44/RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD44抗體IgG雞腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白(ACD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L，溶劑：1%鹽Anti-CD44v4 /FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V4抗體IgG雞芳香酶(ARO)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

地塞米松鈉 98%Anti-CD44v5 /FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V5抗體IgG雞色素C(Cyt-C)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雌三 USPAnti-CD44V6/CD44/HCAM/FITC  熒光素標(biāo)記抗CD44抗體IgG雞降鈣素(CT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雌三 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CD44v7 /FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V7抗體IgG雞可溶性間粘附分子1(sICAM-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雌二 98%Anti-CD45(LCA)/FITC  熒光素標(biāo)記CD45(白共同抗原)抗體雞質(zhì)金屬蛋白酶原1(Pro-MMP-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雌二 99%,用于培養(yǎng)Anti-CD45/RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD45抗體 IgG雞血管**素樣蛋白6(ANGPTL6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

雌二 USP級(jí)Anti-CD45RO/FITC  熒光素標(biāo)記CD45RO抗體IgG雞GTP酶活化蛋白(GAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

雌二 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%Anti-CD46/MCP /FITC  熒光素標(biāo)記膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體(人)IgG雞質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁 ARAnti-CD46/MCP /FITC  熒光素標(biāo)記膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體IgG雞蛋白聚糖(PG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁 SP,99.999%Anti-CA125/Biotin  生物素標(biāo)記兔抗人CA125抗原抗體IgG雞脫氫酶C(LDHC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

 氧化鋁  99.998% metals basis ,5～6μm,粉末Anti-CD48/SLAMF2/FITC  熒光素標(biāo)記CD48抗體IgG雞多巴受體D4(D4R/DRD4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HuSk-FBCs-11細(xì)胞蛋白激酶Elisa試劑盒肌球蛋白輕鏈3抗原IRF4  干擾素調(diào)節(jié)因子4抗體

整合素Elisa試劑盒巨噬移動(dòng)抑制因子抗原IRF3  干擾素調(diào)節(jié)因子3

海藻糖合成酶Elisa試劑盒巨噬炎癥因子1β 抗原IRF-1/MAR1  干擾素調(diào)節(jié)因子1抗體

卵脂Elisa試劑盒CD122/白介素2受體β鏈抗原IRAK4  白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體

糖原合成酶Elisa試劑盒巨噬炎癥蛋白2抗原IRAK2  白介素-1受體相關(guān)激酶2抗體

谷轉(zhuǎn)氨酶Elisa試劑盒質(zhì)金屬蛋白酶13抗原IRAK1  白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體

質(zhì)膜ATP酶Elisa試劑盒質(zhì)金屬蛋白酶20抗原IQGAP1  支架蛋白抗體

二氫黃酮還原酶Elisa試劑盒質(zhì)金屬蛋白酶-17抗原IQCK  IQCK蛋白抗體

鐵氧原蛋白Elisa試劑盒質(zhì)金屬蛋白酶-26抗原IQCJ  IQCJ蛋白抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。