實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：食管癌細(xì)胞；ECA109
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生???

特征特性：1973年建系，來自人食管中段鱗癌組織，小塊法原代培養(yǎng)建系。BALB/c裸鼠移植成瘤。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
二對膦 96%Anti-E.coli DH-5 Alpha /HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記抗DH5α大腸桿體蛋白抗體IgG雞烏頭酶1(ACO1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二異膦 10 wt.% solution in hexanesAnti-E.coli O139/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記抗志賀素大腸桿O139抗體IgG雞骨堿性酶(BALP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二叔丁膦 10 wt.% solution in hexanesAnti-E.coli O157/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記抗大腸埃希氏O157抗體IgG雞纖連蛋白富亮氨跨膜蛋白2(FLRT2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2 - 二叔丁膦-2'，4'，6' -三異聯(lián) 97%Anti-EPEC/E.coli /HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記抗腸致病性大腸桿抗體IgG雞髓過氧化物酶抗體(Anti-MPO)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-雙環(huán)己膦-2 '-聯(lián) 98%Anti-EPEC/E.coli/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記抗普通大腸埃希體蛋白抗體IgG雞載脂蛋白F(ApoF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-雙環(huán)已膦-2 ',6'-二異氧聯(lián) 98%Anti-E.coli/EPEC/FITC  熒光素標(biāo)記抗普通大腸埃希體蛋白抗體IgG雞狀腺過氧化物酶(TPO)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2 - 二膦-2' - （N組，n -二） - 聯(lián) 97%Anti-E.coli O6 (Escherichia coli O6)/FITC  熒光素標(biāo)記大腸埃希桿O6抗體IgG雞球蛋白G Fc段受體II(FcγR II/CD32)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

正丁二(1-金剛烷)膦 97%Anti-E.coli O139/FITC  熒光素標(biāo)記抗志賀素大腸桿O139抗體IgG雞胰蛋白酶原激活肽(TAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二(1-金剛烷)膦 97%Anti-E.coli O157/FITC  熒光素標(biāo)記抗大腸埃希氏O157抗體IgG雞可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(sFMC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

(1R,2R)-(+)-1,2-環(huán)己二L-鹽 98%Anti-EPEC/E.coli /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗腸致病性大腸桿抗體IgG雞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

D-叔亮氨 98%Anti-EphA1 R/FITC  熒光素標(biāo)記抗EphA1-R受體抗體IgG雞酪氨蛋白激酶受體A2(EphA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-(二-叔丁膦)-2'-聯(lián) 98%Anti-EphA2 R/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠酪氨蛋白激酶受體A2抗體IgG雞凝血因子Ⅶ(F7)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

1,3-二異咪唑 97%Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化酪氨蛋白激酶A2受體抗體IgG雞黏病耐藥蛋白1(MX1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

(1,5-環(huán)辛二烯)化釕, 聚合物 95%Anti-EphA4 R/FITC  熒光素標(biāo)記酪氨蛋白激酶受體A4抗體IgG雞載脂蛋白E(ApoE)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二(五環(huán)戊二烯)合釕(III)聚合物 98%Anti-EphA4/FITC  熒光素標(biāo)記抗酪氨蛋白激酶A4抗體IgG雞血管內(nèi)皮抑素抗體(ES-Ab)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  
ECA109，EC109細(xì)胞ataxin-3抗體Elisa試劑盒血小板內(nèi)皮黏附分子-1（抗原）human C3  補(bǔ)體C3抗體

過氧化物酶Elisa試劑盒CD34(多肽抗原)HtrA2/Omi  線粒體絲氨蛋白酶抗體

果糖-1,6-二縮酶Elisa試劑盒神經(jīng)粘附分子1(抗原)HSTF2/HSF2  熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體

果糖-1,6-二縮酶Elisa試劑盒癌胚抗原相關(guān)粘附分子8HSPβ7/cvHSP  熱休克蛋白β7抗體

景天庚酮糖-1,7-二酶Elisa試劑盒CD68抗原HSPC117/C22orf28  22號(hào)染色體開放閱讀框28抗體

β-碳酐酶Elisa試劑盒干生長因子受體/表面分化抗原（抗原）HSPBAP1  熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體

β-櫻草糖苷酶Elisa試劑盒造血干抗原（多肽抗原）HSPB7/cvHSP  熱休克蛋白β7抗體

Δ12-脂肪去飽和酶Elisa試劑盒CD147(抗原)HSPB2  熱休克蛋白B2抗體

β-酮脂酰ACP合成酶Elisa試劑盒CD169抗原HSPA6  熱休克蛋白70家族蛋白6抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。