冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞；Caki-2
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：該細(xì)胞源自一位69歲白人男性的初期腎腺癌組織

培養(yǎng)條件：McCOY's5A+10%FBS

傳代方法：1:3～1:6傳代，每周換液2～3次

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

雙(2,2,6,6,-四-3,5-庚二酮)銅 99%Anti-Phospho-FoxO1 (Ser319) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG雞血漿抗凝蛋白C(PC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

過釕四內(nèi) 97%Anti-Phospho-FoxO1 (Ser256) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG雞狀腺激球蛋白(TSI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

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黃芪苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-FOXO4/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgG雞B連接蛋白(BLNK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

雷公藤紅素  98%Anti-Phospho-FoxO4 (Ser193) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgG雞蛋白C抑制劑(PCI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

雷公藤素  98%Anti-phospho-FOXO4 (phospho S197) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgG雞神經(jīng)肽Y(NPY)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

黃豆黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97%Anti-phospho-FOXO4 (Ser262) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgG雞脂酰肌蛋白聚糖4(GPC4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鄰二二(2-氧)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于環(huán)境分析Anti-FOXF1/FITC  熒光素標(biāo)記叉頭蛋白F1抗體IgG雞泛素蛋白D(UBD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鄰二二(2-氧)酯 94%Anti-FOXM1/HFH 11/FITC  熒光素標(biāo)記插頭蛋白M1抗體IgG雞質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

烯三丁錫 97%Anti-FoxP1/FITC  熒光素標(biāo)記FoxP1（T轉(zhuǎn)錄因子）抗體IgG雞半凝集素4(GAL4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

丁三化錫  95%Anti-FoxP3/FITC  熒光素標(biāo)記叉頭蛋白3-T轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG雞脂酶A2受體1(PLA2R1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化二辛錫 98%Anti-FPR1/FITC  熒光素標(biāo)記肽受體1抗體IgG雞生長調(diào)節(jié)致癌因β(GROβ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  
Caki-2細(xì)胞壁性轉(zhuǎn)化酶Elisa試劑盒綠色熒光蛋白HRH1  組受體H1抗體

色素P450羥化酶Elisa試劑盒雌受體alphaHRG-alpha/Neuregulin 1  Heregulin α蛋白抗體

木質(zhì)素過氧化酶Elisa試劑盒生長受體(抗原)HRG Beta1  Heregulin β蛋白抗體

藍(lán)莓休克病Elisa試劑盒葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（抗原）Hrasls3/HREV107  HRAS樣抑制因子3抗體

NADH脫氫酶Elisa試劑盒hypothetical protein 抗原HRASLS2  HRAS樣抑制因子2抗體

線條病Elisa試劑盒人因/bri3結(jié)合蛋白(抗原)HRAS+KRAS  轉(zhuǎn)化蛋白p21抗體（原癌因H-ras抗體）

藍(lán)莓枯焦病Elisa試劑盒乙肝病pre S1/乙肝病pre S2(抗原)HRAS/Ras/Ras p21  原癌因H-ras抗體

藍(lán)莓帶化病Elisa試劑盒型肝炎病核心蛋白結(jié)合蛋白-1（抗原）HPV33 E7  人類狀瘤病33抗體

藍(lán)莓葉條紋病Elisa試劑盒人類皰疹病8抗原HPV33 E6  人類狀瘤病33抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。