冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱(chēng)：胚腎細(xì)胞；AD293
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞???將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷(xiāo)售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：

5-氧-1-茚酮 98%Anti-HDAC8 /FITC  熒光素標(biāo)記組蛋白去乙酰化酶8抗體IgG雞全色素C合酶(HCCS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

6-氧-1-茚酮 99%Anti-HDAC9/FITC  熒光素標(biāo)記組蛋白去乙?；?抗體IgG雞碳酐酶III(CA3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(+/-)-哌-2-羧二鹽 98%Anti-HDAC10/FITC  熒光素標(biāo)記組蛋白去乙酰化酶10抗體IgG雞單核趨化蛋白3(MCP-3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

釹錠, 99.9% metals basis,,液體石蠟保存Anti-HDAC11/FITC  熒光素標(biāo)記組蛋白去乙?；?1抗體IgG雞皮膚T相關(guān)抗原(CTAGE)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-氨-4'-硝二硫 98%Anti-HDAC12/FITC  熒光素標(biāo)記組蛋白去乙?；?2抗體IgG雞補(bǔ)體因子P(CFP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氨硫酚 98%Anti-CD36L1/SRB1 /FITC  熒光素標(biāo)記高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體IgG雞周期素依賴(lài)性激酶6(CDK6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-氨硫酚 96%Anti-Heamachrome/FITC  熒光素標(biāo)記血紅素抗體IgG雞球蛋白A1 (IgA1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3,3,5,5-四二二硫 99%Anti-HER2 receptor(NT)/FITC  熒光素標(biāo)記抗c-erbB-2受體抗體(N端)IgG雞血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

1,4-二硫 98%Anti-HER2 receptor(NT)/FITC  熒光素標(biāo)記抗c-erbB-2受體抗體(N端)IgG雞XII B組脂酶A2(PLA2G12B)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2－溴芐硫 99%Anti-HER2 receptor/FITC  熒光素標(biāo)記抗HER2受體抗體IgG雞二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3，5－雙(三氟)硫酚 97%Anti-HER2 receptor/FITC  熒光素標(biāo)記抗c-erbB-2受體抗體IgG雞胚外胚層發(fā)育蛋白(EED)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二芐二硫 98%Anti-Phospho-HER2(Tyr1221/1222)/FITC  熒光素標(biāo)記化HER2受體抗體IgG雞腎素(REN)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-溴硫代 98%Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) /FITC  熒光素標(biāo)記化HER2受體抗體IgG雞肌動(dòng)蛋白束蛋白(FSCN)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-溴-5-并噻吩 98%Anti-Phospho-HER2(Tyr1248) /FITC  熒光素標(biāo)記化HER2受體抗體IgG雞載脂蛋白B100(ApoB100)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-溴 99%Anti-Phospho-HER2 (Tyr877)/FITC  熒光素標(biāo)記化HER2受體抗體IgG雞肌球蛋白重鏈9(MYH9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
AD293細(xì)胞百香果木質(zhì)化病Elisa試劑盒硫酯包含蛋白-1(抗原)HIST1H2AH  組蛋白H2A/S抗體

葡萄糖氧化酶Elisa試劑盒P53誘導(dǎo)糖酵解和凋亡調(diào)節(jié)因子蛋白（抗原）His tag(CT)  聚組氨抗體g標(biāo)簽抗體（C端）

泛素化蛋白Elisa試劑盒金屬蛋白酶組織抑制因子-4(抗原)His tag(2D5)  小鼠抗聚組氨單克隆抗體

木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶Elisa試劑盒狀腺過(guò)氧化物酶(抗原)His tag  聚組氨抗體標(biāo)簽抗體

抗性淀粉酶Elisa試劑盒促狀腺素受體（抗原）Hirudin  水蛭素抗體

抗超氧陰離子Elisa試劑盒**素-1（抗原）HIRA/DGGR1  組蛋白替換精蛋白DGGR1抗體

脂酶Elisa試劑盒狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2(抗原)HIPK4  同源相互作用蛋白激酶4抗體

泛素激活酶E3Elisa試劑盒酪氨酶(多肽抗原)HIPK3  Fas相互作用蛋白激酶3抗體

延胡索酶Elisa試劑盒尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1 (抗原)HIPK2  Fas相互作用蛋白激酶2抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。