實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱(chēng)：胚腎細(xì)胞；293T
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：293細(xì)胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱(chēng)為293T。

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
3-溴噻吩 97%Anti-HER3/ErbB3 /FITC  熒光素標(biāo)記HER3受體抗體IgG雞血凝素(HA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-代芐硫 98%Anti-HER3/ErbB3/PE  熒光素PE標(biāo)記HER3受體抗體IgG雞烯式酮羧激酶1(PCK1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-芐硫 98%Anti-HERG/FITC   熒光素標(biāo)記特異性離子通道蛋白抗體IgG雞著絲粒蛋白F(CENPF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硫 95%Anti-HEV/FITC  熒光素標(biāo)記戊型肝炎病抗體IgG雞血管**素受體Tie1(ANG-R-Tie1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-茴香硫 97%Anti-Melamine/Gold  金標(biāo)記抗三聚抗體IgG(10及15nm)雞脂肪合酶(FASN)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3--5-并噻吩 97%Anti-Melamine/Gold   膠體金離子標(biāo)記三聚單克隆抗體IgG雞內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3,5-二硫酚 97%Anti-HGV/FITC  熒光素標(biāo)記庚型肝炎病抗體IgG雞α2纖溶酶抑制因子(α2-PI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,4-二硫酚 95%Anti-hHb/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人血紅蛋白單克隆抗體IgG雞角蛋白18(CK-18/KRT18)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

2,5-二硫酚 98%Anti-HHV4/EBV/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病4抗體IgG雞蛋白S(PROS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,5-二氧硫酚 98%Anti-HHV8/ORF K2/vIL-6/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病8抗體IgG雞酮激酶M2型同工酶(PKM2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3，5-二硫酚 97%Anti-HHV8/ORF50/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病8抗體IgG雞狀旁腺相關(guān)蛋白(PTHrP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,2'-二氨二硫 98%Anti-HHV8/ORF50/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病8抗體IgG雞蛋白激酶C-ε(PKCε)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,3-二噻吩 97%Anti-HHV8/ORF50/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病8抗體IgG雞唾液(SA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,5-二噻吩-3-磺酰 97%Anti-HHV8/ORF K2/FITC  熒光素標(biāo)記人類(lèi)皰疹病8抗體IgG雞L氨解氨酶(PAL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二并噻吩 99%Anti-HIF-1 Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體IgG雞糖盞蛋白(GC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
293T細(xì)胞鯊烯-2，3-環(huán)氧化物Elisa試劑盒血管粘附蛋白1（多肽抗原）HIP4/CBS  絲氨羧半胱氨合成酶抗體

O-乙酰絲氨硫水解酶Elisa試劑盒波形蛋白（抗原）HIP2  泛素蛋白連接酶E2抗體

T4多聚核苷激酶Elisa試劑盒VSIG4 T負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一（抗原）HIP1R/HIP12/HIP3  亨丁頓舞蹈癥相互作用蛋白12抗體

脂氧合酶Elisa試劑盒一種新的絲氨/蘇氨激酶家族成員的因WNK4（多肽抗原）HINT1  組氨三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體

色素P450氧化還原酶Elisa試劑盒鋅指蛋白300(抗原)HIG1/HIGD1A  缺氧誘導(dǎo)因1蛋白抗體

色素P450氧化還原酶Elisa試劑盒鋅指脂蛋白-1a(抗原)HIFPH4  缺氧誘導(dǎo)因子脯氨酰4羥化酶抗體

酰轉(zhuǎn)移酶Elisa試劑盒鋅指脂蛋白-1b(抗原）HIF3 alpha  缺氧誘導(dǎo)因子3α/HIF-3α抗體

煙酰腺嘌呤二核苷;還原型輔酶ⅡElisa試劑盒人鋅指脂蛋白-1c(抗原)HIF-1β/ARNT1  缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗體

牻牛兒焦Elisa試劑盒干擾素-γ多肽抗原（大、小鼠）HIF-1 Alpha  缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體HIF-1α
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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