冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：HumanHth
形態(tài)特性：上皮樣

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

傳代方法：1:3傳代，2-3天換液一次

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

化  AR,≥99.0%Anti-IL-6/FITC   熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG雞尿苷二葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(UGCG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

化 ≥99.99% metals basisAnti-IL-6/FITC (mouse、rat)  熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG雞肝配蛋白A4 (EFNA4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

化  ACS, ≥99.0%Anti-IL-6/FITC  熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG雞法尼二法尼轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

硫化銨溶液 ACS,22.0-24.0%Anti-gp130/IL-6R /FITC  熒光素標(biāo)記白介素-6受體抗體IgG雞雌受體β(ERβ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

高鎂，無水 ARAnti-IL-6(Human)/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記白介素6(人)抗體IgG雞唾液乙酰酯酶(SIAE)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硫化銨溶液 40-48 wt. % in H2OAnti-IL-7/FITC   熒光素標(biāo)記白介素7抗體IgG雞囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

高鎂 六水合物 99.99% metals basisAnti-Il-7R a/CD127 /FITC  熒光素標(biāo)記白介素-7受體a抗體IgG雞微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

樣品核磁費(fèi)(NMR) 多規(guī)格Anti-IL-8/FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、牛、豬、羊、兔白介素8抗體IgG雞封閉蛋白14(CLDN14)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

癸二二辛酯  Standard for GC, ≥98.5% (GC)Anti-IL-9/FITC   熒光素標(biāo)記白介素9抗體IgG雞B活化因子 (BAFF/CD257/TNFSF13B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

反-1,4-二-2- 95%Anti-IL-10/FITC   熒光素標(biāo)記白介素10抗體IgG雞促胰液素(SCT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3,5-二芐溴 98%Anti-IL-10R/CD210/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-10受體抗體IgG雞過氧化物酶體生物合成因子2 (PEX2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氨乙硫 98%Anti-IL-10R Beta/IL10RB/CDw210b/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-10受體β抗體IgG雞骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

對 99%Anti-IL-11/FITC  熒光素標(biāo)記白介素11抗體IgG雞白介素3(IL-3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁 ARAnti-IL-12/FITC   熒光素標(biāo)記白介素12抗體IgG雞肝臟糖原化酶(PYGL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁 SP,99.999%Anti-IL-12/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素12抗體(人)IgG雞X組脂酶A2(PLA2G10)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HumanHth細(xì)胞苦馬豆素Elisa試劑盒化糖原合酶激酶3α/β抗原HCV-Core protein  型肝炎病-C區(qū)抗體

玉米黃質(zhì)環(huán)氧化酶Elisa試劑盒 3-甘油脫氫酶HCN4  環(huán)化核苷調(diào)控陽離子通道蛋白亞型4

錳超氧化物歧化酶Elisa試劑盒谷氨脫羧酶-65(抗原)HCN3  /鈉超化激活環(huán)核苷門控通道蛋白3抗體

3-甘油脫氫酶Elisa試劑盒糖原合酶激酶-3β（多肽）HCN2  /鈉超化激活環(huán)核苷門控通道蛋白2抗體

脂酶Elisa試劑盒核突觸蛋白-γ抗原HCMV UL49  人巨病UL49蛋白抗體

氨糖苷類-3-轉(zhuǎn)移酶Elisa試劑盒胰高血糖素樣肽-1受體多肽HCMV UL49  人巨病UL49蛋白抗體

轉(zhuǎn)酮酶Elisa試劑盒慶大霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白HCMV UL23  人巨病UL23抗體

5羥色Elisa試劑盒重組谷胱甘肽-轉(zhuǎn)移酶HCMV  人巨病抗體

果膠酯酶Elisa試劑盒慶大霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白HCLS1/LckBP1  造血干特異性蛋白抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。