實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：HE-MEF

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好???我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
 氧化鋁  99.998% metals basis ,5～6μm,粉末Anti-IL-12R Beta1/CD212/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-12受體β1抗體IgG雞鳥氨氨酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁 99．99%，鍍膜Anti-IL-12R Beta2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-12受體β2抗體IgG雞間隙連接蛋白26(CX26)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧化鋁G TLCAnti-IL-13/FITC   熒光素標(biāo)記白介素13抗體IgG雞金屬硫蛋白2 (MT2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

三氧化二銻 SPAnti-IL-13Ra1/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-13受體a1抗體IgG雞神經(jīng)激肽A(NKA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

三氧化二銻 99.99% metals basisAnti-IL-13Ra2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-13受體a2抗體IgG雞粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

三氧化二銻 AR，99.5%Anti-IL-14/Taxilin alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素14抗體IgG雞二酯酶4D(PDE4D)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

三氧化二銻 99.9%，平均粒徑：0.7 μmAnti-IL-15/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15抗體IgG雞5核苷酶(5-NT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

三氧化二銻 99.999% metals basisAnti-IL-15R Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15受體α抗體IgG雞γ1肌動蛋白(ACTG1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

三氧化二銻 CP，99%Anti-IL-16/FITC   熒光素標(biāo)記白介素-16抗體IgG雞分裂周期蛋白23(CDC23)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性氧化鋁 40-60目 GCAnti-IL-16/FITC  熒光素標(biāo)記白介素16抗體IgG雞谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶κ1(GSTκ1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

活性氧化鋁 60-80目 GCAnti-IL-17/FITC  熒光素FITC標(biāo)記白介素-17抗體IgG雞血管緊張素II受體1(ANG II R1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

活性氧化鋁 80-100目 GCAnti-IL-17B/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-17B抗體IgG雞染色質(zhì)區(qū)解旋酶DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氟化鋁 99.9% metals basisAnti-IL-17/PE  熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgG雞脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氟化鋁 99.99% metals basisAnti-IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC  熒光素標(biāo)記白介素17受體抗體IgG雞唾液結(jié)合球蛋白樣凝集素8(SIGLEC8)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鋁片 0.1mm,99.99% metals basisAnti-IL-17(Interleukin-17)human/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-17抗體（人）IgG雞肝生長因子(HGF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HE-MEF細(xì)胞煙堿去化酶Elisa試劑盒人血清白蛋白Hck  造血激酶抗體

性酯酶Elisa試劑盒人beta 亞人絨毛膜促性腺抗原HCG/LH/FSH/TSH alpha  人絨毛膜促性腺α亞抗體(Cg A)

維生素B3Elisa試劑盒高遷移率族蛋白-1(抗原)HCG Beta(4H7)  人絨毛膜促性腺β亞單抗

維生素B5Elisa試劑盒水蛭素HCG alpha(4A8)  人絨毛膜促性腺α 亞單抗

維生素B7Elisa試劑盒人類狀瘤病16抗原HCF2/Heparin Cofactor II  肝素輔助因子II抗體

維生素B9Elisa試劑盒鐵調(diào)節(jié)蛋白25HCF-1  宿主因子1抗體

木葡聚糖水解酶Elisa試劑盒4羥壬烯偶聯(lián)牛血清白蛋白HCCR2/LETMD1  原癌因2抗體

對氧酶Elisa試劑盒干擾素-γ多肽抗原（人）HCCR1/BRI3BP  原因1/bri3結(jié)合蛋白抗體

對氧酶1Elisa試劑盒白介素-17抗原（人）HBZ/Hemoglobin ζ  血紅蛋白ζ鏈抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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