實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：胃癌細(xì)胞；Hs746T
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：HS-746T細(xì)胞1973年建系（NavalbioscienCA-slaboratory???。該細(xì)胞系的細(xì)胞大小，形狀及核狀態(tài)均會(huì)在培養(yǎng)過程中發(fā)生變化。由于細(xì)胞的惡性化，染色多為亞三倍體（46%）。

培養(yǎng)條件：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS(GIBCO)

傳代方法：1:3傳代,2-3天傳一代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
氧化鑭 99.9% metals basisAnti-LH/FITC  熒光素標(biāo)記抗人促黃體**素抗體IgG雞水通道蛋白2(AQP-2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氧化鑭 99.99%Anti-LH/FITC  熒光素標(biāo)記抗人促黃體**素抗體IgG雞P選擇素(SELP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  AR,99%Anti-LH/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人促黃體**素單克隆抗體IgG雞α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  SP,光譜純anti-LH/CG Receptor/FITC  熒光素標(biāo)記人促黃體**素受體抗體IgG雞脂酶B(PLB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  99.99% metals basisAnti-LH/Biotin  生物素標(biāo)記抗人促黃體**素抗體IgG雞唾液結(jié)合球蛋白樣凝集素12(SIGLEC12)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  CP,98.5%Anti-L-HDC /FITC  熒光素標(biāo)記L-組氨脫羧酶抗體IgG雞神經(jīng)型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  99.9% metals basisAnti-LHRH/GNRH /FITC  熒光素標(biāo)記黃體釋放抗體/促性腺釋放抗體IgG雞胰高血糖素(GC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

氧化镥  99.99% metals basisAnti-LI-cadherin/FITC  熒光素標(biāo)記肝腸鈣粘連蛋白抗體IgG雞組織蛋白酶K(CTSK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

金屬鋰粒 99.9% metals basisAnti-LIF /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗白血病抑制因子抗體IgG雞V型膠原α2(COL5α2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

金屬鋰棒 99.9% metals basis，棒Anti-LIFR/FITC  熒光素標(biāo)記抗白血病抑制因子受體抗體IgG雞可溶性腺苷環(huán)化酶(sAC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

水質(zhì)鋰標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-LIMK1 /FITC   熒光素標(biāo)記單絲氨蛋白激酶1抗體IgG雞凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋰 低鈉級(jí)，99.95% metals basisAnti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC  熒光素標(biāo)記化單絲氨蛋白激酶1/2抗體IgG雞白介素1α(IL-1α)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

金屬鋰 電池級(jí)，99.9% metals basisAnti-Lingo-1/FITC  熒光素標(biāo)記Nogo受體作用蛋白抗體IgG雞α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋰 高鈉級(jí)，98.5%Anti-LIR-6/CD85i/LILRA1/FITC  熒光素標(biāo)記白球蛋白樣受體6抗體IgG雞11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碲化鉛 99.99%Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC  熒光素標(biāo)記白球蛋白樣受體-B抗體IgG雞CD163分子(CD163)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Hs746T細(xì)胞半胱氨蛋白酶抑制劑;胱抑素CElisa試劑盒熒光素標(biāo)記牛IgMgremlin  骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體

天冬氨蛋白酶抑制劑Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記雞IgGGREB1  癌雌調(diào)控蛋白GREB1抗體

S1核酶Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記雞IgMGRB2/ASH  生長因子受體結(jié)合蛋白2抗體

刀豆素AElisa試劑盒熒光素標(biāo)記狗IgGGRB10  生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體

雌二Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記狗IgMGRASP65  高爾體外周膜蛋白p65抗體

孕酮Elisa試劑盒熒光素FITC標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)GRAP2  生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體

環(huán)腺苷二核糖Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記羊IgMGranzyme K  顆粒酶K抗體

脫鎂葉綠素a氧化酶Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記豚鼠IgGGranzyme D/B/E/N/G/F/H  顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體

谷氨轉(zhuǎn)氨酶Elisa試劑盒熒光素標(biāo)記豚鼠IgMGRAMD3/NS3TP2  型肝炎病-NS3反轉(zhuǎn)錄激活蛋白2抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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