冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞；HA-VSMC
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS，0.05mg/mlVtC，0.01mg/mlinsulin，0.01mg/mltransferrin，0.01mg/mlsodiumselenite

傳代方法：1：2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解???，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

銣標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-MATH1/FITC  熒光素標(biāo)記腸道分化干MATH-1蛋白抗體IgG雞線粒體超氧化物歧化酶2(SOD2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 輕質(zhì)AR,99.5%Anti-Matrilin 1/CMP/FITC  熒光素標(biāo)記軟骨質(zhì)蛋白抗體IgG雞多聚球蛋白受體(PIGR/SC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:5μmAnti-MBP/FITC  熒光素標(biāo)記髓鞘堿性蛋白抗體IgG雞膜橋蛋白(Ponticulin)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 GRAnti-MBP/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記髓鞘堿性蛋白抗體IgG雞八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OBTF4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:10μmAnti-Mcl-1/FITC  熒光素標(biāo)記髓樣白血病-1抗體IgG雞糖化白蛋白(GA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 SPAnti-Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)/FITC  熒光素標(biāo)記化髓樣白血病-1抗體IgG雞質(zhì)膜膜泡關(guān)聯(lián)蛋白 (PLVAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:2μmAnti-MCM2/FITC  熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白2抗體IgG雞抗繆勒管(AMH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-MCM3/FITC  熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白3抗體IgG雞血小板相關(guān)球蛋白(PAIg)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，體:0.05%Na2CO3Anti-MCM5/CDC46/FITC  熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白5抗體IgG雞絲氨/蘇氨激酶39(STK39)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

親水性氣相納米二氧化硅Hydr 99.8%,比表面積（BET）：200m2/g;粒Anti-MCM7/FITC  熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白7抗體IgG雞生長受體(GHR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 1-3mm 顆粒，99.999%Anti-MCP-1/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬趨化蛋白-1抗體IgG雞纖維蛋白原β(FGβ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

納米二氧化硅 99.5%,50±5nmAnti-MCP-1/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬趨化蛋白-1抗體(人)IgG雞血紅蛋白β(HBβ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.999%,直徑2mm，高度10mm,圓柱體狀A(yù)nti-MCP-2/CCL8/FITC  熒光素標(biāo)記單核趨化蛋白2抗體(人)IgG雞腎上腺髓質(zhì)素(ADM)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：200m2/g;化物：0.01Anti-MCP-2/CCL8/FITC  熒光素標(biāo)記單核趨化蛋白2抗體(大、小鼠)IgG雞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：300m2/g；粒徑：7-40nAnti-MCP-3/CCL7/FITC  熒光素標(biāo)記單核趨化蛋白3抗體(人)IgG雞信號(hào)素3B (SEMA3B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HA-VSMC細(xì)胞植物非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記小鼠IgG(流式同型對(duì)照)GPAM  線粒體甘油3酰轉(zhuǎn)移酶抗體

半胱氨蛋白酶3Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)GPA33  糖蛋白A33抗體

褪綠矮化病Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對(duì)照)GPA/GYPA/CD235a  血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體

谷胱甘肽氧化還原酶Elisa試劑盒熒光素Cy5.5標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)GP65/SDFR1/NPTN  間質(zhì)衍化因子受體1抗體

精氨脫亞酶Elisa試劑盒熒光素Cy5.5標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)GP1B/CD42b  血小板糖蛋白GPIb抗體

精氨脫亞酶Elisa試劑盒熒光素Cy5.5標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對(duì)照)GOT2  谷草轉(zhuǎn)氨酶2抗體

二氫玉米素Elisa試劑盒(親和純化) 牛IgMGOLPH2/GP73  高爾體膜蛋白GP73抗體

順式玉米素核苷Elisa試劑盒(HPLC純化) 雞IgGGoat Anti-rat IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的羊抗大鼠IgG

異戊烯腺嘌呤9-糖苷Elisa試劑盒(親和純化) 雞IgMGoat Anti-rat IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgG
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

產(chǎn)品留言

標(biāo)題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗(yàn)證碼

點(diǎn)擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請(qǐng)您留下您的詳細(xì)聯(lián)系方式!