冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：原位胰腺腺癌細(xì)胞；BxPCS-3
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：這個(gè)細(xì)胞株不表達(dá)囊腫性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)子(CFTR)。CFTR陽性的細(xì)胞株是Capan-1(ATCCHTB-79)。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：消化5-10分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

鎢粉 9.95%,<1.1μmAnti-HSA/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgG雞血小板衍生生長(zhǎng)因子亞A(PDGFA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鈦 99%,2-4μmMouse Anti-YERSINIA PESTIS Monoclonal Anti-body /FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏莢膜抗原F1單克隆抗體IgG雞核孔蛋白107kda(NUP107)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鈦 99%,40nmAnti-Mouse IgA/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗小鼠IgA抗體雞谷氨半胱氨連接酶修飾亞(GCLM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鈦 99.99% metals basisAnti-MPO /FITC  熒光素標(biāo)記髓過氧化物酶抗體IgG雞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氮化鈦 99%，20nmAnti-HAVCR1/KIM1/TIM1/FITC  熒光素標(biāo)記型肝炎病受體1IgG雞著絲粒蛋白I(CENPI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氮化鈦 99.5%,2-10 μmAnti-HSD11B2/HSD2 /FITC  熒光素標(biāo)記羥類固脫氫酶11β2抗體IgG雞多功能蛋白聚糖(VS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋱粉 99.9% metals basisAnti-MR/FITC  熒光素標(biāo)記鹽皮質(zhì)受體抗體IgG雞V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病癌因同源物B (RELB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

一氧化鈦 99.9% metals basis，粉末，100-200 meshAnti-MRAS/Mras/FITC  熒光素標(biāo)記原癌因M-ras抗體IgG雞原鈣黏素15(PCDH15)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

一氧化鈦 99.9%，顆粒：1-5mmAnti-Mre11/HNGS1/FITC  熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體IgG雞核因子-κB亞p65(NF-κB p65)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鉭 99.9%Anti-Phospho-Mre11 (Ser676)/FITC  熒光素標(biāo)記化DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體IgG雞組織因子(TF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鉭 99.5%,≤3 μmAnti-MRP1/FITC  熒光素標(biāo)記多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體IgG雞微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳氮化鈦 powder, 1-2 μm, 99%Anti-CITED1/ABCC1/FITC  熒光素標(biāo)記結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體IgG雞破骨相關(guān)受體(OSCAR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鎢 粉末，99.9% metals basis, <10μmAnti-MRP2/FITC  熒光素標(biāo)記多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體雞甘肽/甘素受體1(GALR1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鎢 9.8%，3-20nm Anti-MRP3/FITC  熒光素標(biāo)記多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體IgG雞β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳化鎢 粉末，99.9% metals basis, ≤1μmAnti-MRP4/ABCC4 /FITC  熒光素標(biāo)記多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體IgG雞凝血酶/抗凝血酶復(fù)合物(TAT)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
BxPCS-3細(xì)胞乙羧化酶Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記人IgAGoat Anti-Mouse IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

維生素D2Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記猴IgGGoat Anti-Mouse IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

維生素D3Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記猴IgMGoat Anti-Mouse IgM/PE  PE標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

皺縮病Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記小鼠IgMGoat Anti-Mouse IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

鑲脈病Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記豬IgGGoat Anti-Mouse IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

色素C氧化酶Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記水貂IgGGoat Anti-Mouse IgM/FITC  FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

F-ATPaseElisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記兔IgMGoat Anti-Mouse IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

色素P450單加氧酶Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記大鼠IgMGoat Anti-Mouse IgM/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM

腺苷三結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa試劑盒熒光素PE標(biāo)記重組人白介素-1受體拮抗劑Goat Anti-Mouse IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。