冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：胰腺癌細(xì)胞；Panc0CG8.13
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

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反式-1，3-二烯  97%Anti-Phospho-NF-KappaB p105 (Ser933)/FITC  熒光素標(biāo)記化核因子p50/k因結(jié)合核因子抗體IgG雞生長(zhǎng)抑素受體1(SSTR1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,3-二烯 (cis + trans), ≥92%（GC)Anti-NGAL/FITC(Neutrophil Gelatinase associated Lipocalin)  熒光素標(biāo)記中性粒明膠酶相關(guān)載脂蛋白抗體IgG雞白介素17(IL-17)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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Panc0CG8.13細(xì)胞蔗糖合成酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記人IgGGoat Anti-human IgM/Bio  生物素標(biāo)記的羊抗人IgM

番茄黑環(huán)病Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記人IgMGoat Anti-human IgM/APC  APC標(biāo)記的羊抗人IgM

可溶性蛋白酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記人IgAGoat Anti-human IgM/AP  堿性酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgM

山梨脫氫酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記猴IgGGoat Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgM

麥胚凝集素Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記猴IgMGoat Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM

綠色斑點(diǎn)花葉病Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記小鼠IgMGoat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgM

蘇氨蛋白激酶2Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記豬IgGGoat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗人IgM

脂酰乙Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記水貂IgGGoat anti-human IgM whole serum  羊抗人IgM抗血清

粒束縛態(tài)淀粉合成酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標(biāo)記兔IgMGoat Anti-human IgM  羊抗人IgM
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

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