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產(chǎn)品名稱：胰腺癌細胞；JF-305
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

4,5-二氟-2- 98%Anti-p-Nrf2/FITC  熒光素標記化核因子2相關(guān)因子2抗體IgG雞脂蛋白a(LP-a)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-氟-4-  98%Anti-Nrn1/Cpg15/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體IgG雞凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95/TNFRSF6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-氟-4- 98% Anti-CD303/BDCA-2/CLEC4C  熒光素標記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體IgG雞抑瘤素M(OSM)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-氟-3- 98%Anti-CD304/BDCA-4/NRP-1 /FITC  熒光素標記神經(jīng)纖毛蛋白-1抗體IgG雞血漿抗凝蛋白S(PS)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

4--3- 98%Anti-NRP-2/FITC  熒光素標記神經(jīng)纖毛蛋白-2抗體IgG雞蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

2,4,6-三 98%Anti-NEDD4L/NEDD4-2/FITC  熒光素標記泛素連接酶NEDD4-2抗體IgG雞轉(zhuǎn)錄激活因子-3(ATF-3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

5-溴-5-硝-1,3-二惡烷 98%Anti-Phospho-NEDD4L (Ser342) /FITC  熒光素標記化泛素連接酶NEDD4-2抗體IgG雞Bκ 輕肽因增強子核因子抑制因子ε(Nfkbie)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

溴乙酰溴 97%Anti-NRSF/REST/FITC  熒光素標記神經(jīng)元抑制蛋白抗體IgG雞補體因子8g(C8g)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

桂油 FCCAnti-NSBP1/FITC  熒光素標記核小體結(jié)合蛋白1抗體IgG雞血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/KDR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

硫雙二酚 97%Anti-NSE/FITC   熒光素標記神經(jīng)元特異性烯化酶抗體IgG雞血管**素樣蛋白3(ANGPTL3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

磺醋酰 分析標準品Anti-Ntn1/FITC  熒光素標記軸突導(dǎo)向因子1抗體IgG雞球蛋白G Fc片段(Fcγ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

磺醋酰 98%Anti-NT-3/FITC  熒光素標記神經(jīng)營養(yǎng)因子-3抗體IgG雞胸腺依賴性抗原(TD-Ag)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-巰酯  98%Anti-NT-4/NT-5 /FITC  熒光素標記神經(jīng)生長因子4/5抗體IgG雞絨毛膜促性腺α肽(CGα)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鄰 99%Anti-NTCP/FITC  熒光素標記鈉離子/?；悄懝厕D(zhuǎn)運蛋白IgG雞角膜蛋白(KERA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-乙酰氧-2-丁酮 98%Anti-NTN/FITC  熒光素標記神經(jīng)生長因子抗體IgG雞凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
JF-305細胞金屬硫蛋白Elisa試劑盒FITC標記重組金黃色葡萄球蛋白AGoat Anti-Guinea pig IgG/APC  APC標記的羊抗豚鼠IgG

辣椒環(huán)斑病Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標記的重組蛋白GGoat Anti-Guinea pig IgG/AP  堿性酶（AP）標記的羊抗豚鼠IgG

莽草脫氫酶Elisa試劑盒金標記兔抗熒光素 (10nm/15nm)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的羊抗豚鼠IgG

多酚氧化酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標記兔IgG(流式同型對照)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的羊抗豚鼠IgG

蛋白(肽酰脯氨酰順;反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1Elisa試劑盒熒光素PE-Cy5標記兔IgG(流式同型對照)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗豚鼠IgG

RACα絲氨;蘇氨蛋白激酶Elisa試劑盒兔IgG(親和層析純???)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的羊抗豚鼠IgG

胰島素樣生長因子1Elisa試劑盒熒光素PE-Cy3標記兔IgG(流式同型對照)Goat Anti-Guinea pig IgG  羊抗豚鼠IgG

神經(jīng)肽YElisa試劑盒(親和純化) 兔IgMGoat anti-Gpig IgG whole serum  羊抗豚鼠IgG抗血清

骨堿性酶Elisa試劑盒熒光素PE標記兔IgG(流式同型對照)Goat Anti-Chicken IgG/RBITC  羅丹明標記的羊抗雞IgG