實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：胰腺癌細胞；Panc05.04
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
 硫新斯的明 98%Anti-NGFR/FITC  熒光素標記神經(jīng)生長因子受體抗體gG雞著絲粒蛋白H(CENPH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

正鋯 70 wt. % 正溶液Anti-NGN3/FITC  熒光素標記神經(jīng)元素3抗體IgG雞性別決定區(qū)Y框蛋白18(SOX18)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

色 97%(GC)Anti-NGX6 /FITC  熒光素標記鼻咽癌相關(guān)因6抗體IgG雞血管緊張素III(ANG III)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-溴-5-氧 98%Anti-NHE1/FITC  熒光素標記鈉氫通道蛋白抗體IgG雞正輔因子4(PC4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:5μmAnti-NIK/FITC  熒光素標記NFkB誘導(dǎo)的激酶抗體IgG雞突觸素(SYP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:10μmAnti-NIPP1/ARD1/FITC  熒光素標記核抑制蛋白酶1抗體IgG雞巨噬活化因子(MAF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒徑:2μmAnti-NIS/FITC  熒光素標記鈉轉(zhuǎn)運體蛋白抗體IgG雞碳酐酶XII(CA12)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

吸油棉 400*500*4mm*92G 外層無紡布料Anti-NIT2/FITC  熒光素標記抗NIT2蛋白抗體IgG雞質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

任我游N560  5寸高清屏Anti-NKA/FITC  熒光素標記神經(jīng)激肽A抗體IgG雞轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蚌型復(fù)合式活性碳口罩 CFB4SAnti-NK-1/Substance P Receptor /FITC  熒光素標記P物質(zhì)受體抗體IgG雞S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

環(huán)沙星 98%Anti-NK-2R/FITC  熒光素標記神經(jīng)激肽A受體/K物質(zhì)受體抗體IgG雞彈性蛋白微纖維界面蛋白1(EMILIN 1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

馬鈴薯淀粉 BRAnti-NKB/FITC  熒光素標記神經(jīng)激肽 B抗體IgG雞絲氨蛋白酶12(PRSS12)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蒽醌-2-磺鈉鹽 97%Anti-NKG2A/CD159a/KLRC1/FITC  熒光素標記NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗體IgG雞α-黑色素(αMSH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

箱式電阻爐SX2-4-10Anti-NKG2C/FITC  熒光素標記NK受體2C/自然殺傷活化性受體2C抗體IgG雞胱抑素C(Cys-C)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

馬鈴薯淀粉 BRAnti-NKG2D/CD314 /FITC  熒光素標記NK受體/自然殺傷活化性受體抗體IgG雞核孔蛋白98kda(NUP98)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Panc05.04細胞麥角固Elisa試劑盒熒光素Cy3標記大鼠IgMGoat Anti-human IgG/RBITC  羅丹明標記的羊抗人IgG

7-脫氫膽固Elisa試劑盒熒光素Cy3標記重組人白介素-1受體拮抗劑Goat Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的羊抗人IgG

乙激酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標記血藍蛋白Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的羊抗人IgG

C3H木質(zhì)素合成酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標記雞卵白蛋白Goat Anti-human IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的羊抗人IgG

ACC氧化酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標記人血白蛋白Goat Anti-human IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗人IgG

乙酰輔酶A羧化酶還原酶Elisa試劑盒熒光素Cy3標記胰糜蛋白酶Goat Anti-human IgG/PE  PE標記的羊抗人IgG

乙酰輔酶A羧化酶還原酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 555標記羊IgG(流式同型對照)Goat Anti-human IgG/HRP  辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG

核苷二激酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 555標記大鼠IgG(流式同型對照)Goat Anti-human IgG/Gold  膠體金標記的羊抗人IgG

谷蛋白Elisa試劑盒熒光素PE-Cy7標記兔IgG(流式同型對照)Goat Anti-human IgG/FITC  FITC標記的羊抗人IgG
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。